目的:改进PCR-RFLP法,确认线粒体异质性基因并测定异质性线粒体基因的相对含量.方法:依据先期实验中克隆测序得到的ECV304细胞中线粒体基因(D-LOOP区)多态性位点,采用两轮PCR法,以第1轮PCR胶回收产物为模板,作第2轮PCR,并在第2轮PCR中引入限制性内切酶位点,酶切产物行琼脂糖电泳,测定异质性线粒体基因的相对含量.结果:ECV304细胞中存在513A/G异质性,二者比例约为1:3.结论:确证ECV304细胞中含有513A/G异质性碱基,改良PCR-RFLP法测定异质性线粒体基因相对含量较为简单可靠,适用于异质性线粒体基因的研究.