目的：制备并鉴定携带小鼠神经生长因子前导肽（PN）和人内吗啡肽2（EM2）融合基因的重组非增殖型腺病毒。方法:PNEM2目的基因经酶切插入pAxCAwt载体，构建PNEM2pAxCAwt重组黏粒，脂质体转染293细胞获取重组腺病毒。PCR鉴定后扩增不含野生型病毒的阳性克隆并纯化，采用TCID50法测定病毒滴度；体外感染NIH3T3细胞观察转基因的表达，酶联免疫反应（EIA）法测定表达产物浓度。结果:融合基因序列正确，PCR可检测到401 bp的融合基因条带并排除野生病毒株，腺病毒AdPNEM2滴度为2.03×1010pfu／ml。NIH3T3细胞转染病毒后，细胞培养液内可检测到EM2的表达，明显高于空转染及未转染细胞（P＜0.05），且随时间的延长，表达水平逐渐上升。结论:成功构建能够在非神经内分泌细胞内转基因表达成熟人EM2的非增殖型腺病毒，为进一步将其应用于慢性疼痛的基因治疗奠定了基础。