人FcγRⅡ真核表达质粒的构建及稳定转染细胞系的建立
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国家自然科学基金(30730068),国家重点基础研究发展计划(“973”计划,2005CB523200).


Construction of eukaryotic expression plasmid of human FcγRⅡand establishment of cell line stably transfected with the constructed plasmid
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Supported by National Natural Science Foundation of China(30730068) and National Program on Key Basic Research Project of China(“973” Program,2005CB523200).

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    目的:建立稳定表达人FcγRⅡ(human Fc gamma receptor Ⅱ ,huFcγRⅡ)的真核细胞系,为后续研究奠定基础。方法:采用RT-PCR方法从人外周血白细胞合成FcγRⅡcDNA,构建huFcγRⅡ表达质粒pcDNA3-huFcγRⅡ,经酶切和PCR鉴定后,将pcDNA3-huFcγRⅡ质粒通过脂质体转染法转染COS7细胞,并经G418筛选获得稳定表达huFcγRⅡ的细胞克隆。采用免疫荧光法和玫瑰花环试验检测huFcγRⅡ的表达。结果:构建的pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒经酶切鉴定与预期一致,稳定转入COS7细胞后,经免疫荧光染色,约90%的转染细胞可见荧光,而未转染的COS7对照细胞未见荧光。结论:成功构建pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒,建立了稳定表达huFcγRⅡ的细胞系,为进一步研究奠定了基础。

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  • 收稿日期:2008-02-25
  • 最后修改日期:2008-06-12
  • 录用日期:2008-08-29
  • 在线发布日期: 2008-09-12
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