针对人β-catenin基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定
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国家自然科学基金(30872934),北京市自然科学基金(5072019).


Construction and identification of shRNA eukaryotic vector targeting human β-catenin
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Supported by National Natural Science Foundation of China (30872934) and Beijing Municipal Science Foundation(5072019).

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    目的:构建针对人β-catenin基因mRNA的shRNA真核表达载体,并转染HEK-293细胞,观察其对β-catenin的抑制效应。方法:化学合成用于产生针对β-catenin shRNA的对应DNA片段,将合成的寡核苷酸链退火形成双链,克隆入pSUPER真核表达载体,对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定,筛选阳性克隆。通过脂质体介导,把重组质粒转染HEK-293细胞,RT-PCR、蛋白质印迹法检测其对β-catenin mRNA和蛋白的干涉效果,MTT比色法检测β-catenin基因表达抑制的细胞和对照组细胞的增殖。结果:RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示转染组β-catenin基因的表达水平下调,MTT检测显示β-catenin表达抑制的细胞光密度值下降,细胞增殖受到了抑制(P<0.01)。结论:成功构建了针对人β-catenin基因的shRNA载体,转染HEK-293细胞后可抑制β-catenin基因的表达。

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  • 收稿日期:2009-01-10
  • 最后修改日期:2009-07-16
  • 录用日期:2009-07-17
  • 在线发布日期: 2009-08-25
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