应用杆状病毒系统制备8型腺相关病毒
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国家“十一五”新药创制重大专项(2009ZX09103-687),国家自然科学基金(30772477).


Preparation of adeno-associated virus serotype 8 using baculovirus system
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Fund Project:

Supported by the National “Eleventh Five-year Plan” Key Project for Development of New Drugs (2009ZX09103-687) and National Natural Science Foundation of China (30772477).

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    摘要:

    \[摘要\]目的建立应用杆状病毒系统制备8型腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)的技术体系,并初步检测所制备病毒的感染活力。方法采用杆状病毒生产系统包装rAAV8-EGFP,经高效液相色谱法提取并纯化病毒,实时荧光定量PCR测定病毒滴度,通过观察绿色荧光蛋白的表达强度来检测rAAV8-EGFP对HEK-293细胞的感染活力。结果实时荧光定量PCR显示成功制备高滴度rAAV8-EGFP,滴度可达1.5×1012 vg/ml,100 ml摇瓶共得到1.5×1013 vg rAAV8-EGFP病毒颗粒;感染后的HEK-293细胞具有较强的绿色荧光蛋白表达。结论应用杆状病毒系统成功制备高滴度、高活力的重组腺相关病毒,为后续研究奠定了基础。

    Abstract:

    \[Abstract\]ObjectiveTo set up a baculovirus system for preparing recombinant adeno-associated virus serotype 8 (rAAV8) and to preliminarily examine the infection viability of the prepared virus in vitro. MethodsThe rAAV8-EGFP was prepared using baculovirus system and was subsequently extracted and purified by high performance liquid chromatography. The viral titer was determined by real-time quantitative PCR and its infection viability for HEK-293 cells was examined by observing the EGFP reporter. ResultsReal-time quantitative PCR showed that high titer of rAAV8-EGFP was prepared (1.5×1013 vg/bottle\[100 ml medium\]) and strong expression of EGFP was observed in HEK-293 cells infected with rAAV8-EGFP. ConclusionThe baculovirus system is capable of producing rAAV8 with high titer and infection viability, paving a way for future research.

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  • 收稿日期:2010-11-30
  • 最后修改日期:2011-01-04
  • 录用日期:2011-01-05
  • 在线发布日期: 2011-02-21
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