【目的】 通过贴壁分离法、免疫磁珠分离法和流式细胞术分离法从人外周血获取单核细胞,比较细胞纯度、细胞得率以及实验成本和耗时,发现通过免疫磁珠法获得的单核细胞纯度高、得率高,实验成本较低、耗时短,为获取人外周血来源的单核细胞提供实验依据。 【方法】 单核细胞由骨髓中的多能造血干细胞、髓样干细胞分化而来,在骨髓中发育,并进入血液,停留2~3 d后迁移到周围组织中。单核细胞数量少,且独立的细胞株难以获得。那么在实验中如何获得足够数量,状态良好的单核细胞呢？单核细胞占外周血细胞的3%~8%,可从血液中分离获得。贴壁法、免疫磁珠法和流式细胞术法是分选单核细胞的经典方法,如何根据现有的实验条件,结合细胞纯度、细胞得率、实验成本、耗时四项指标选择最适合的一种实验方法呢？ 【结果】 我们发现,通过贴壁分离法,每获得2×10⁷个单核细胞细胞纯度18.8%,细胞得率5%,成本为500元,耗时6 h。通过免疫磁珠法,每获得2×10⁷个单核细胞细胞纯度80%,细胞得率11%,成本为1 500元,耗时6 h。而用流式细胞术分离细胞,每获得2×10⁷个单核细胞细胞纯度为73.4%,细胞得率7.5%,成本为2 100元,耗时10 h。综合分析细胞纯度、细胞得率以及实验成本和耗时,免疫磁珠法具有细胞纯度高、得率高,实验成本较低、耗时短的优点。 【结论】 因此,我们采用免疫磁珠法分离外周血单核细胞。