【立论依据】 原发性肾上腺皮质功能减退症是临床上一类内分泌疾病,主要是由于双侧肾上腺绝大部分或全部被毁,从而导致体内出现肾上腺皮质激素分泌不足而产生的临床表现。故其现阶段治疗以肾上腺皮质激素替代治疗为主。但长期激素替代治疗难以达到合理的剂量,且激素替代治疗不但在应激反应中无效,还可能存在副作用和潜在的风险。而通过干细胞技术诱导属于成体干细胞的脂肪干细胞(ASCs)向肾上腺皮质细胞分化并移植来恢复自身的分泌肾上腺皮质激素能力,既可解决激素替代疗法的剂量问题,又可弥补肾上腺细胞移植存在的供体来源及免疫排斥的不足,也能应对其它干细胞移植带来的较难获得、伦理及安全性等问题。 【设计思路】 本研究通过改变培养条件,加入视黄酸、ACTH、低钾、血管紧张素、肾上腺组织上清液诱导ASCs表达合成类固醇激素的关键酶P450scc、CYP11B等和表达ACTHR情况,探讨产生有功能的ASCs来源的肾上腺皮质样细胞方法,判断是否产生有功能的肾上腺皮质样细胞,并将其移植至切除肾上腺大鼠模型肾包膜下,观察其生存情况和产生肾上腺皮质激素的能力。 【实验内容】 观察诱导液对ASCs增殖、分化、形成肾上腺皮质样细胞的影响,及特异标志表达情况。测定诱导后培养液中皮质酮、醛固酮浓度及其变化情况,判断是否产生有功能的肾上腺皮质样细胞。观察诱导分化的ASCs,搭载在明胶海绵上移植入切除肾上腺的大鼠模型肾包膜下,宿主大鼠的生存情况,测定血液中皮质酮、醛固酮的浓度,并取移植物切片观察。 【材料】 实验动物为SD大鼠,其它实验材料主要有qPCR、免疫细胞化学及蛋白质印迹等实验方法相关材料。 【可行性】 本研究指导教师有所需研究方法的经验,已建立ASCs的分离、培养、扩增方法。并且本研究室具有完备的与本研究项目有关的设备和条件,故在技术上和人力上可确保本项目的完成。 【创新性】 对于肾上腺皮质功能减退症的治疗,细胞移植法比传统激素替代法更安全,效果更好。与肾上腺细胞移植相比,本研究可以解决后者存在的供体来源及免疫排斥的问题。而与采用其它干细胞转分化移植相比,ASCs具有分化能力强、安全、易采集、无伦理问题等优点。