【立论依据】 石榴花是传统维吾尔药材,前期课题组的研究中发现石榴花多酚(pomegranate flower polyphone,PFP)对糖尿病大鼠的血管内皮具有一定的保护作用。本研究拟观察PFP对大鼠离体动脉条以及高糖诱导下舒缩作用的影响,并探讨其作用机制。 【设计思路】 (1)首先明确PFP的用药浓度范围,做出量效曲线。(2)分别观察PFP对保留内皮和去内皮动脉条舒缩的影响,明确PFP是否通过内皮细胞发挥作用。(3)若为内皮依赖性,分别加入L-NAME(NOS抑制剂)和环氧酶抑制剂吲哚美辛预处理明确是否与一氧化氮(NO)和前列腺素作用有关。(4)进一步加入K⁺通道抑制剂预处理,明确其舒张作用是否与血管K⁺通道有关。最后,对血管条进行高糖孵育,观察PFP对其舒缩的影响。 【实验内容】 采用BL-420型生物信息处理系统大鼠离体血管功能实验装置,描记张力变化。(1)每组血管来自6只同批大鼠,分别保留和去除内皮。采用累积加药法分别观察1~1 000 mg/L各浓度石榴花多酚水溶液对去氧肾上腺素(PE)预收缩动脉条的作用。(2)动脉条经高糖孵育4 h后,观察舒张率的变化。(3)采用乙酰胆碱(ACh)检验血管内皮活性。结果显示:①在内皮完整主动脉条,100~1 000 mg/L PFP对PE预收缩的血管环具有浓度依赖的舒张作用且该舒张作用为内皮依赖性;②经L-NAME预处理后,PFP的血管舒张效应被抑制;③加入吲哚美辛预处理不能抑制PFP的舒张效应;④K⁺通道抑制剂格列苯脲、氯化钡和四乙基氯化铵预处理后,PFP产生的最大舒张率(Emax)分别是(52.60±9.64)%、(49.04±7.70)% 和 (44.14±14.62)%,与处理前相比,3个干预组均有显著性差异(P>0.05)。由此可见:①PFP在一定的浓度下具有舒张血管作用;②其作用机制与NO合成通路具有密切关系;③结果显示PFP血管舒张作用与钾离子通道有关,与前列腺素合成无关。 【材料】 SD大鼠(250~300 g);BL-420型生物信息处理系统;石榴花多酚;试剂均购于Sigma公司。 【可行性】 我课题组对石榴花有7年的研究基础;带教老师有多年的研究民族药的经验;学生们具有良好的科研素质;实验所需设备齐全,经费充足;石榴花多酚提取物有保障。从人员,实验条件和经费等方面均有保障。 【创新性】 (1)石榴花多酚对离体大鼠动脉条的影响研究尚属首次;(2)本实验分别研究石榴花多酚对离体大鼠动脉条以及对高糖孵育动脉条的影响,对本科生来说,深度和广度均有一定的创新性。