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摘要:目的:探讨胰液中K-ras 12密码子点突变对胰腺癌诊断的临床应用价值.方法:采用内镜下置鼻胰管方法收集20例胰腺疾病的胰液标本,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)检测胰液K-ras基因第12密码子点突变,与肿瘤标记物CA19-9及CEA检测结果比较.结果:12例胰腺癌患者胰液标本中K-ras突变率为58.3％(7/12);8例慢性胰腺炎患者标本K-ras突变率为12.5％(1/8),胰腺癌胰液K-ras基因突变检测的敏感性为58.3％,特异性为87.5％,阳性预示值为87.5％,阴性预示值为58.3％.同一组病例以血清CA19-9>37 U/ml、CEA>4.5 μg/ml为阳性界值.胰腺癌血清 CA19-9、CEA阳性率分别为58.3％(7/12)、41.7％(5/12).结论:K-ras基因突变与胰腺癌相关性好,胰液中K-ras 12密码子突变率高,特异性强,为胰腺癌早期诊断的初步筛选提供了手段.

摘要:目的:探讨胰管刷检标本K-ras基因突变检测在胰腺癌诊断中的价值.方法:应用突变富集聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性(SSCP)法检测胰腺疾病胰管刷检标本K-ras基因第1外显子第12密码子点突变.结果:35例胰管刷检标本PCR扩增均获成功,成功率100％.20例胰腺癌中14例检测到K-ras突变,7例慢性胰腺炎1例K-ras突变,两组间差异显著(P<0.05).胰腺囊腺瘤、十二指肠乳头癌均未见K-ras突变.胰管刷检标本K-ras突变与胰腺癌部位无关.胰管刷检K-ras突变检测诊断胰腺癌的敏感性、特异性、准确性分别为70％、94％、83％.结论:检测胰管刷检标本中K-ras基因突变有助于提高胰腺癌的诊断,具有良好的临床应用前景.

摘要:目的:探讨胰管刷检标本P53蛋白检测对胰管良、恶性狭窄的鉴别诊断价值.方法:应用免疫细胞化学的方法检测25例ERCP示胰管狭窄或梗阻病例的胰管刷检标本P53蛋白的表达.结果:16例胰腺癌性胰管狭窄胰管刷检标本P53蛋白阳性率为56％,9例炎性胰管狭窄胰管刷检标本未见P53蛋白阳性表达.胰腺癌胰头部胰管狭窄刷检标本P53染色阳性率(73％)高于体尾部(20％).结论:胰管刷检标本细胞学检查的同时进行P53检测有助于胰腺癌与慢性胰腺炎的鉴别.

摘要:目的:探讨胰管刷检细胞端粒酶活性检测在胰腺癌诊断中的价值.方法:对27例胰腺疾病患者采用ERCP下胰管细胞刷获取标本,H-E染色,进行病理学观察;其中21例采用PCR-TRAP-ELISA法测端粒酶活性,并与常规细胞学及血清CEA、CA19-9检查作比较.结果:胰腺癌患者端粒酶活性水平明显高于慢性胰腺炎患者,以端粒酶活性D>0.2为阳性界限值,胰腺癌端粒酶活性阳性率为77.8％,慢性胰腺炎无1例端粒酶阳性,胰管刷检细胞端粒酶活性检测和细胞学诊断总符合率为77.8％,端粒酶活性与胰腺癌部位未见明显相关.结论:胰管刷检标本细胞学检查的同时结合端粒酶活性检测是提高胰腺癌诊断水平的有效方法.

摘要:目的:研究超声引导下切割针组织学检查对胰腺肿块的诊断价值.方法:采用体表B超引导下,19 G切割式活检针配自动活检枪对27例胰腺肿块行组织学检查.结果:胰腺肿块的穿刺成功率96.3％,满槽率85.2％;胰腺癌穿刺总成功率为95.7％,满槽率87％,诊断敏感性为91.3％,特异性为100％,诊断准确性为92.6％;慢性胰腺炎总成功率为100％,满槽率75％.结论:体表B超引导下自动穿刺切割式活检对直径2 cm以上胰腺肿块的诊断和鉴别诊断具有较高的临床价值.

摘要:目的:探讨P21ras在胰腺疾病组织中的表达和临床意义.方法:应用EnVision显色系统免疫组化方法分别检测胰腺癌组织(24例)、癌周组织(77例)、手术切缘正常组织(16例)和慢性胰腺炎组织(24例)中P21ras的表达情况.结果:P21ras在胰腺导管腺癌组织中的表达阳性率为58.3％(14/24),与慢性胰腺炎胰腺导管增生组织的45.8％(11/24)相比差异无显著性 (P> 0.05);P21ras在良、恶性胰腺疾病增生性病变中的表达阳性率为36.6％(30/82),与正常胰腺组织(0％)相比有显著性差异(P<0.05);P21ras蛋白在正常胰腺组织、导管增生性病变、导管不典型增生中的表达阳性率呈渐进过程,而且增生性导管病变与不典型增生(78.9％)相比差异显著(P<0.05).结论:P21ras过度表达在胰腺导管细胞向恶性转变的过程中起作用.

摘要:目的:构建小鼠趋化因子MIP1-α(mMIP1-α)的重组腺病毒载体并在小鼠肝癌细胞中表达,为肝癌基因治疗提供实验基础.方法:PCR扩增含有mMIP1-α的质粒,将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1以及线性化的重组穿梭质粒pTrack-CMV- mMIP1-α共转化BJ5183受体菌并在其中发生同源重组,利用重组前后抗性的改变筛选出重组子,重组腺病毒质粒经过293细胞的包装、扩增和纯化后,感染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6,一步法提取细胞总RNA,RT-PCR检测mMIP1-α的mRNA.琼脂糖凝胶打孔法体外观察感染上清中mMIP1-α对小鼠脾细胞的趋化活性.结果:得到了携带mMIP1-α的重组腺病毒,纯化后滴度为4×1011 efu/ml,在感染后的Hepa1-6细胞中检测到mMIP1-α的表达,上清中mMIP1-α的趋化指数为6.3.结论:成功地构建了携带mMIP1-α的重组腺病毒载体,为下一步应用于肝癌的基因治疗提供了基础.

摘要:目的:探讨苦参碱(Ma)对肝癌细胞株HepG2端粒酶活性的调控作用和细胞周期的影响.方法:将不同浓度的Ma加入肝癌细胞株HepG2细胞,以 TRAP-ELISA方法测定其端粒酶活性;采用Lipofect 脂质体转染法将携带人类端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子和报告基因的质粒转染至肝癌细胞株HepG2细胞,2 h后加入不同浓度的Ma,孵育48 h后,分别检测其报告基因荧光素酶活性;同时将不同浓度的Ma加入肝癌细胞株HepG2细胞,并于加药后第24 h、48 h、72 h分别收集细胞,流式细胞仪测定细胞周期各时相的百分比.结果:在750 μg /ml浓度,Ma可抑制端粒酶活性,明显下调hTERT启动子的表达;加药后第48 h、72 h,500 μg /ml、750 μg /ml组中肝癌细胞G0/G1期百分比明显增多,S期和部分G2/M期显著减少.结论:Ma可抑制肝癌细胞株HepG2细胞hTERT的表达并影响端粒酶活性和细胞周期.

摘要:目的:对原发性肝癌患者腹腔游离癌细胞进行定性研究,探讨术后腹腔种植的原因及防治方法.方法:58例原发性肝癌患者,取手术中肿瘤切除前后的腹腔灌洗液,立即H-E染色,检查游离癌细胞.结果:进腹后切除前灌洗液发现游离癌细胞者7例,切除前后两次灌洗液中均发现癌细胞者1例,无1例仅切除后发现癌细胞.结论:腹腔游离癌细胞阳性的相关因素包括:(1)TNM分期的Ⅲ期、Ⅳ期,尤其是T3、T4分期;(2)自发性肝癌破裂;(3)肿瘤位于肝表面,尤其是侵犯包膜;(4)腹腔积液≥50 ml.切除前、后用蒸馏水充分冲洗腹腔临床易于开展,对预防和治疗肝癌术后腹腔种植有一定的作用.

摘要:目的:探讨可弯曲穿刺针在肝脏肿瘤乙醇注射消融(PEI)中的使用方法及应用价值.方法:18个<5 cm的肝脏恶性肿瘤应用可弯曲穿刺针行PEI.对位置深或中心层面穿刺途径中有门脉、胆管阻挡常规穿刺针不易穿中的小病灶,首先将外套针穿至病灶旁,再通过外套针将可弯曲细针的弯曲方向对准病灶并穿入病灶内,注入适量乙醇;对较大病灶通过改变弯针的方向在病灶内多点注射乙醇.结果:18个肝脏肿瘤经≥2次PEI,乙醇弥散区均覆盖全部病灶.3个月后CT多期扫描或增强MRI复查,≤3 cm的肿瘤完全坏死10个、大部坏死2个,>3 cm的肿瘤中完全坏死4个,大部坏死2个,部分患者血清肿瘤标志物水平显著下降.结论:使用可弯曲穿刺针行肝脏肿瘤PEI操作方便、效果良好,可作为常规穿刺针的重要补充.

摘要:目的:研究特异性分离中国汉族人多囊肾病1型致病基因(polycystic kidney disease gene 1,PKD1)多拷贝区的方法,以排除同源序列对该基因突变检测的干扰.方法:利用与同源序列间的个别碱基差异设计8对能涵盖PKD1多拷贝区的长链PCR引物,分别对两例健康汉族人基因组DNA进行PCR,其扩增产物通过巢式PCR进行序列测定.结果:通过优化PCR体系,尤其是以高质量基因组DNA为模板,适当提高退火温度,经巢式PCR测序证实扩增产物序列与PKD1多拷贝区一致.结论:该研究采用的长链PCR体系可克服同源序列的影响,适用于中国汉族人PKD1多拷贝区的特异性扩增,为进一步通过单链构象多态性分析检测汉族人PKD1突变位点奠定基础.

摘要:目的:研究肝移植期间供肝组织中核因子NF-κB的激活特征及其活性调控机制.方法:改良Kamada法建立大鼠原位肝脏移植模型,按供肝在4℃乳酸林格液中的冷保存时间,实验分冷保存2 h组和6 h组,凝胶迁移率改变分析法(EMSA)和Western印迹法测定移植期间不同时相供肝组织中NF-κB的活性变化及其主要抑制蛋白IκB-α、IκB-β的表达水平.结果:两组供肝组织在冷缺血保存期间其NF-κB活性与正常肝组织相比无明显差异(P>0.05),再灌注后30 min至6 h两组的NF-κB活性均出现显著的诱导激活(P<0.01),其中冷保存2 h组供肝组织的NF-κB活性高峰出现在再灌注1 h;而冷保存6 h组在再灌注30 min即达到活性高峰,并维持在较高的激活水平;供肝组织中抑制蛋白IκB-α的含量显著高于IκB-β,两组的IκB-α蛋白在再灌注30 min至1 h均有明显降解(P<0.05),而IκB-β蛋白仅在冷保存6 h组有较明显的降解(再灌注30 min).结论:核因子NF-κB仅在供肝的再灌注早期呈诱导性激活,其激活特征与供肝的冷保存再灌注损伤有关,抑制蛋白IκB-α在供肝的NF-κB活性调控中可能起了主要作用.

摘要:目的:建立BALB/c小鼠实验性自身免疫性心肌炎模型.方法:采用差速离心、分级饱和硫酸铵沉淀和DEAE-Sephadex A-50离子交换层析纯化等方法自猪心中提取并纯化心肌肌凝蛋白,经SDS-PAGE和Western印迹方法鉴定.以此蛋白免疫遗传易感的BALB/c小鼠,建立自身免疫性心肌炎模型.结果:97％(35/36)小鼠在免疫后第14天出现不同程度的心肌炎病理改变,主要表现为心肌间质单个核细胞浸润、肌纤维排列紊乱和肌浆溶解.免疫鼠血清肌钙蛋白I水平升高,并出现较高滴度的抗肌凝蛋白自身抗体.结论:猪心肌肌凝蛋白可以诱导BALB/c小鼠出现典型的自身免疫性心肌炎.

摘要:目的:探讨失血性休克对单个核细胞释放细胞因子的影响.方法:建立大鼠失血性休克模型,采用抗体双夹心ELISA法检测门静脉血、小肠、脾脏单个核细胞分泌的肿瘤坏死因子(TNF-α)与白介素6(IL-6).结果:在内毒素(LPS)刺激下,休克组动物的小肠与门静脉血单个核细胞释放的TNF-α量在复苏后4 h和24 h低于假手术组动物.结论:失血性休克能使小肠单个核细胞在复苏后4 h和24 h对内毒素的刺激呈现低反应.

摘要:目的:探讨5-HT1A受体结合容量改变对高血压发病的影响.方法:通过放射性配体与受体结合实验,探讨不同周龄自发性高血压大鼠(SHR)和对照组Wistar-Kyoto (WKY)大鼠在脑区不同部位5-HT1A受体的结合特征.结果:SHR不同脑区脑组织膜的Bmax随着大鼠周龄的增加而增大,且有显著差异;WKY鼠差异不明显.相同脑区不同周龄SHR的Bmax均大于WKY大鼠,且随着周龄的增加血压呈上升趋势,其5-HT1A受体的Bmax与血压成正比,WKY无此现象.4～5周龄的SHR为高血压未形成期,10～12及以上周龄的SHR处于高血压的形成期.结论:当血压发生变化时,中枢5-HT1A受体结合容量发生继发性改变.不同脑区中枢5-HT1A受体结合容量可能与高血压疾病的发生相关.

摘要:目的:探讨脊髓麻醉联合硬膜外麻醉行肾移植术时脊髓麻醉平面与麻醉效果的关系.方法:90名肾移植患者随机分为3组,均采用硬膜外麻醉联合脊髓麻醉.A组(n=30)脊髓麻醉平面调至T3-4,B组(n=30)为T5-7,C组(n=30)为T8以下.观察和比较各组术中自脊髓麻醉开始至硬膜外麻醉开始用药时间和用药量、血压波动幅度和多巴胺用量以及术中不良反应的发生情况.结果:自脊髓麻醉开始至硬膜外开始用药的时间A组>B组>C组(P<0.05).硬膜外用药总量 A组