摘要:

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摘要:目的:探讨经纤维支气管镜(纤支镜)腔内超声(EUS)定位后行穿刺针吸活检对支气管黏膜正常的肺癌的诊断价值.方法:对16例疑有黏膜下或管外肿瘤的患者用Olympus UM-BS20-26R型微型超声探头(USP)以水囊法和(或)直接接触法进行EUS检查,并行经纤支镜穿刺针吸活检.结果:16例患者以常规纤支镜检查无异常,经EUS显示支气管管壁各层次结构,明确病灶部位、范围,穿刺针吸活检证实8例为支气管肺腺癌,4例为支气管肺鳞状细胞癌,3例为支气管腺癌淋巴结转移,诊断敏感性达93.8%;所有患者检查后无气胸、出血等并发症.结论:选择性应用EUS,对明确支气管黏膜下或管外病变性质、正确引导穿刺具有较大价值,有助于支气管肺癌的诊断.

摘要:目的:探讨IL-13对小鼠气道平滑肌细胞(ASMC)的促增殖作用及其机制.方法:将分离的小鼠ASMC进行传代培养,在培养液中分别加入PBS、IL-13、IL-13+AG1478、IL-13+TGF-α中和抗体、IL-13+EGF中和抗体、IL-13+HB-EGF中和抗体、IL-13+地塞米松;用MTT比色法和3H-TdR掺入法测定ASMC增殖,用ELISA法测定上清液中TGF-α的浓度.结果:IL-13组的MTT D值和3H-TdR掺入量较对照组明显增加(P＜0.01),IL-13+AG1478组、IL-13+TGF-α中和抗体组、IL-13+地塞米松组MTT D值和3H-TdR掺入量均显著低于IL-13组(P＜0.01),IL-13组1 h和3 h ASMC分泌TGF-α均显著高于对照组(P＜0.01),IL-13+地塞米松组显著低于IL-13组(P＜0.01).结论:IL-13能促进ASMC的增殖,其可能机制为IL-13刺激ASMC分泌TGF-α,TGF-α与EGFR结合使之活化,引起细胞增殖.

摘要:目的:研究免疫活性物质卡介苗基因组DNA(BCG-DNA)对哮喘患者外周血单个核细胞(PBMC) IFN-γ和IL-4产生的影响.方法:分离哮喘患者PBMC,分别加入BCG-DNA、地塞米松刺激培养,ELISA检测培养上清中IFN-γ及IL-4含量,RT-PCR检测PBMC IFN-γ mRNA及IL-4 mRNA的表达量,并与空白对照组相比较.结果:地塞米松在体外对哮喘患者PBMC产生的IFN-γ mRNA和蛋白、IL-4 mRNA和蛋白均有抑制作用;BCG-DNA抑制哮喘患者PBMC IL-4 mRNA和蛋白的分泌,而促进IFN-γ mRNA和蛋白的分泌,与对照组比较差异显著(P<0.01),且在体外对PBMC无毒性.结论:BCG-DNA不仅具有和地塞米松相同的下调IL-4表达的作用,而且还具有地塞米松所没有的诱导IFN-γ表达的作用,利于纠正哮喘患者体内存在的Th1/Th2比例失衡状态,起到治疗作用.

摘要:目的:观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预对小鼠支气管哮喘模型Clara细胞数量及其分泌蛋白CC16表达的影响.方法:卵蛋白(OVA)致敏、滴鼻激发建立BALB/c小鼠哮喘模型.将小鼠随机分为对照组、哮喘组、NAC干预组,每组10只.应用免疫组化方法检测各组小鼠肺组织Clara细胞数量及细胞内CC16含量.Western印迹法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中CC16含量.结果:哮喘组小鼠终末及呼吸性细支气管上皮Clara细胞分别占上皮细胞的(58.05±3.75)%及(63.70±1.79)%,与对照组的(74.54±5.81)%及(78.46±1.68)%相比差异有显著性(P＜0.01);NAC干预组为(62.74±1.72)%和(67.47±3.53)%,与哮喘组相比有所增加(P＜0.05).同时,哮喘组Clara细胞内CC16含量较对照组明显减少(P<0.01);NAC干预后,促进了CC16的合成(P＜0.05).哮喘组小鼠BALF中CC16蛋白水平为(35.6±4.0),与对照组的(54.7±5.0)比较差异有显著性(P＜0.01);NAC干预组CC16蛋白水平为(44.1±3.2),与哮喘组比较差异也有显著性(P＜0.05).NAC干预组BALF细胞总数及嗜酸粒细胞比例较哮喘组均下降,气道炎症较哮喘组减轻.结论:哮喘小鼠的气道炎症可导致Clara细胞数量及CC16的合成及分泌量减少,抗氧化剂NAC可通过促进CC16的合成和分泌抑制气道炎症反应.

摘要:目的:研究腺病毒介导的小鼠内皮抑素基因联合化疗对肺癌的综合治疗作用.方法:利用病毒重组技术将内皮抑素基因克隆入增殖缺陷型腺病毒基因组中,构建携带内皮抑素基因的重组腺病毒Ad-mES,复制小鼠Lewis肺癌的动物模型,随机分成4组,每组10只:化疗组,皮下隔日注射环磷酰胺150 mg/kg,共3次;基因治疗组,一次性瘤内多点注射6×1010 pfu/ml的Ad-mES病毒纯化液100 μl;基因联合化疗组,Ad-mES病毒纯化液联合环磷酰胺,剂量同上;对照组,以0.9%生理盐水100 μl替代环磷酰胺.定期测量各组肿瘤体积,采用Western印迹分析检测基因转导后肿瘤组织中内皮抑素的表达,应用免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD),观察内皮抑素基因对肿瘤血管生长的抑制作用.结果:构建了表达内皮抑素的重组腺病毒载体Ad-mES;各治疗组荷瘤C57BL/6小鼠肿瘤生长抑制明显,以基因联合化疗组尤为显著(P＜0.01);基因治疗组和基因联合化疗组MVD与对照组和化疗组相比差异显著(P＜0.05).基因治疗过程中未见明显不良反应,且荷瘤鼠生存期明显延长,以联合治疗组为著(P＜0.05).结论:所构建的Ad-mES重组腺病毒载体可有效表达具有生物学活性的内皮抑素;并能减少肿瘤内微血管生成、减慢肿瘤增殖、延长生存期.

摘要:目的:探讨光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对体外培养的人肺腺癌细胞系A549凋亡的影响.方法:以人肺腺癌细胞系A549为研究对象,用MTT法筛选最佳PDT参数.实验分为对照组(不进行PDT)和PDT组,在PDT 24 h后,采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的梯形条带、流式细胞术检测细胞周期及凋亡率、TUNEL标记法测定细胞凋亡指数(AI).结果:血卟啉衍生物(HPD)浓度10 mg/L、激光剂量10 J/cm2是PDT对A549细胞杀伤作用的最佳条件.当激光剂量均为10 J/cm2时,采取6组不同的功率时间组合测得的D492值无统计学差异.在最佳PDT条件下,琼脂糖电泳结果可见PDT组产生了特征性的DNA梯形条带;流式细胞术检测显示PDT组发生了G0/G1期生长停顿,凋亡率为(18.443±7.122)%,显著高于对照组的(0.301±0.361)%(P<0.01);TUNEL标记法也证实该组可见明显的棕黄色凋亡细胞,AI为(18.480±9.555)%,明显高于对照组的(0.880±0.944)%(P<0.01).结论:PDT通过诱导凋亡对体外培养的A549细胞产生杀伤作用.

摘要:目的:研究以呼吸负荷和肺容量慢性增加为特点的慢性阻塞性肺病(COPD)患者膈肌中肌凝蛋白表型的变化.方法:24例患者经开胸手术取膈肌标本.通过非变性电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结合Western印迹分析检测膈肌肌凝蛋白重链(myosin heavy chain,MHC)各种异构体组分改变.分析患者第1秒用力肺活量(FEV1)、肺总量(TLC)和功能残气量(FRC)等检测结果与慢MHC(β-MHC)占总MHC比例的相关性.结果:慢性过度负荷与β-MHC比例增加,快MHC比例减少有关;COPD患者β-MHC比例为(75.36±9.00)%,明显高于对照组的(50.00±4.81)%(P＜0.01);β-MHC比例与FEV1呈线性负相关(r=-0.89, P＜0.01),与TLC呈线性正相关(r=0.60, P＜0.01),与FRC呈线性正相关(r=0.74, P＜0.01).结论:COPD患者快肌凝蛋白比例减少而慢肌凝蛋白比例增加,这种改变与肺过度充气有关,也可能反映膈肌对于新的功能需要的适应.

摘要:目的:研究downstream of kinases(dok1)与表皮生长因子受体(EGFR)之间的相互作用,寻找EGFR的可能底物或调控蛋白,以深入认识EGFR下游信号转导机制.方法: 将EGFR胞内域与LexA蛋白融合作为DNA结合蛋白,分别将dok1、dok1PTB及dok1ΔPTB与B42AD蛋白融合作为激活域蛋白,共转化酵母菌后,通过β-半乳糖苷酶活性检测、生长实验以及免疫共沉淀实验分析它们之间的相互作用.结果: dok1及dok1PTB与EGFR之间在酵母中存在结合,而dok1ΔPTB不与EGFR结合. 结论: 首次证实EGFR与dok1之间具有相互作用,dok1的PTB结构域在介导此相互作用的过程中非常重要.

摘要:目的:构建以鼠心肌轻链蛋白基因(mlc-2v)为启动子、携带人血管内皮生长因子hVEGF165基因的重组腺病毒载体,检测该重组腺病毒载体对心肌细胞转染的靶向性.方法:酶切腺病毒载体PDC315自身启动子CMV,构建腺病毒载体PDC317,分别接入hVEGF165、mlc-2v基因,构建腺病毒载体PDC-mlc-hVEGF165.鉴定正确后,将PDC-mlc-hVEGF165与Lipofectamine共转染至293细胞,经同源重组获得以mlc-2v为启动子、携带hVEGF165基因的重组腺病毒Ad-mlc-hVEGF165,同步构建无靶向性的重组腺病毒Ad-hVEGF165.扩增并测定滴度后,Ad-hVEGF165、Ad-mlc-hVEGF165分别转染体外培养的心肌细胞、骨骼肌细胞及平滑肌细胞,利用ELISA、Western印迹分析等方法检测Ad-mlc-hVEGF165转染心肌细胞的靶向性.结果:构建的病毒正确,病毒滴度为2.8×109 pfu/ml.转染3 d后,Ad-hVEGF165组在各培养细胞的上清液及细胞内均检测到VEGF的表达,而Ad-mlc-hVEGF165组仅在心肌细胞中有VEGF的表达,且Ad-mlc-hVEGF165组心肌细胞分泌的VEGF要少于Ad-hVEGF165组.结论:成功构建了以mlc-2v为启动子、携带人VEGF基因的重组腺病毒Ad-mlc-hVEGF165;该重组载体能体外靶向性转染心肌细胞并使之表达VEGF.

摘要:目的:探讨血浆高敏感C反应蛋白(hs-CRP)和淀粉样物质A(SAA)与冠状动脉病变程度和病变活动性之间的关系.方法:分析94例冠状动脉造影患者的临床资料,并采用乳胶增强速率散射比浊法测定患者循环血中hs-CRP与SAA水平.结果:临床诊断急性冠状动脉综合征患者血浆hs-CRP和SAA水平为(16.34±16.02)和(9.46±6.97) mg/L,明显高于正常对照组的(1.07±1.12)和(1.24±1.11) mg/L(P＜0.01);稳定型心绞痛组为(2.76±2.31)和(2.85±2.13)mg/L,与对照组间无显著性差异;中、重度病变,单支、双支、三支病变及Gensini积分21～40分者hs-CRP和SAA水平明显高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).结论:冠心病的发生、发展过程中存在炎症反应;血浆hs-CRP和SAA水平可作为炎症标志物反映冠状动脉炎症状况,对急性冠状动脉综合征的判断有一定价值.

摘要:目的:探讨炎症细胞趋化因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)在脊髓损伤早期的表达变化及其在脊髓继发性损伤炎症免疫反应中的作用机制.方法:采用改良Nystrm法制备大鼠胸段脊髓后路压迫损伤模型,运用RT-PCR技术检测脊髓损伤后6 h的MCP-1 mRNA的表达水平,免疫组化方法检测损伤后3、6、12 h和1、3、5、7 d各个时间段MCP-1阳性细胞与损伤局部单核/巨噬细胞数目的变化.结果:脊髓损伤后,MCP-1 mRNA水平明显升高,MCP-1阳性细胞高峰时间出现在脊髓损伤后12 h至3 d,同时,单核/巨噬细胞高峰时间出现在损伤后3～7 d.结论:MCP-1、单核/巨噬细胞均参与了脊髓损伤后早期的继发反应,单核/巨噬细胞出现的高峰时间滞后于MCP-1阳性细胞.

摘要:目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)与气液界面无血清培养原代兔气管黏膜上皮细胞的相互作用.方法:利用低温酶消化法分离兔气管黏膜上皮细胞,无血清培养液及胶原覆盖膜形成的气液界面培养,使上皮细胞分化成假复层黏膜纤毛上皮细胞,然后加入NTHi感染上皮细胞,通过扫描电镜(SEM)和透射电镜(TEM)观察其形态结构变化.结果:NTHi感染24 h后,SEM示气管黏膜上皮细胞表面结构破坏,90%细胞凋亡或死亡,纤毛倒伏、断裂,细菌与非纤毛上皮细胞连接;TEM示细菌黏附在细胞表面,细胞表面有较多微绒毛,伴微绒毛延伸或伪足包绕细菌,将其吞噬胞内.结论:NTHi黏附在上皮细胞表面,上皮细胞通过伪足形成和微绒毛延伸包绕细菌,将细菌吞噬在胞内;NTHi对上皮细胞有毒性作用,致细胞变性坏死或凋亡.

摘要:目的:研究局部热化疗对大鼠皮下移植胶质瘤血管再生的影响,探讨其作为胶质瘤辅助治疗的可行性.方法:将传代培养的C6细胞接种于大鼠背部皮下,肿瘤生长至1.5～2 cm直径时,分组进行局部热疗、化疗和热化疗.继续观察皮下肿瘤生长情况,测量瘤体体积和质量;用免疫组化S-P法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达;用因子Ⅷ相关抗原(FⅧ-RA)染色标记血管内皮细胞,以微血管密度(MVD)作为定量检测指标.用H-E染色法、电镜观察肿瘤增殖状况和肿瘤微血管结构的变化.结果:热疗、化疗、热化疗与对照组比较:瘤体缩小,质量减轻;PCNA、IGF-Ⅰ、VEGF蛋白表达降低(P<0.01),MVD降低(P<0.01),且热化疗较单纯热疗和化疗降低更明显(P<0.01).热化疗后肿瘤细胞增殖明显受抑制,微血管外径变小,血管壁变厚,血管减少,血管内皮细胞紧密连接增多,细胞连接间隙减小,有的血管甚至只能发现完整的基膜而缺乏内皮细胞.结论:热疗、化疗、热化疗能抑制肿瘤血管再生与肿瘤增殖,且热化疗有协同作用;热化疗抑制胶质瘤的PCNA合成与表达、以及抑制IGF-Ⅰ的合成与分泌是其抑制肿瘤增殖的机制之一;热化疗能降低肿瘤VEGF合成与分泌,破坏与减少肿瘤血管再生.作为胶质瘤辅助治疗有良好的临床应用前景.

摘要:目的:建立测定积雪草配方颗粒中积雪草苷含量的毛细管区带电泳法(CZE).方法:积雪草配方颗粒用甲醇超声提取,用未涂渍熔融石英毛细管(内径75 μm ,长度48.5 cm,有效长度40 cm),以25 mmol*L-1硼砂溶液(含50%甲醇)为背景电解质溶液(pH 9.1),运行电压27 kV,温度23℃,压力进样5 kPa×5 s, 检测波长为206 nm.结果:在11 min内积雪草苷与内标及其他成分能达到基线分离,最低检测限0.010 3 mg*ml-1,积雪草苷在0.048 6～0.173 5 mg*ml-1范围内呈良好的线性关系 (r=0.999 8),加样回收率为(97.6±2.6)%,低、中、高3种浓度的日内和日间的精密度结果分别为3.5%、2.1%、2.6%和4.1%、2.8%、3.7%,3个批号的样品中积雪草苷的含量分别为(0.39±0.01)%、(1.17±0.02)%、(1.74±0.04)%.结论:毛细管电泳法测定结果准确可靠,方法简便、快速、环保,可用于样品中积雪草苷的含量测定.

摘要:目的:探讨褶合光谱-标准加入法测定复方磺胺甲噁唑片剂中磺胺甲噁唑(SMZ)和甲氧苄啶(TMP)含量的可操作性和准确性.方法:采用TMP标准加入法,用紫外可见分光光度计采集吸收度信息,通过褶合光谱程序双组分定量分析系统计算出SMZ与TMP含量.结果:SMZ、TMP平均回收率分别为100.42%、96.83%,RSD值为0.37%和2.55%.结论:对于处方比例悬殊且紫外光谱吸收强度差异大的双组分药物,在确定最佳标准加入量后,采用褶合光谱法可以不经分离同时测定.

摘要:目的:探讨Holter检测评价冠心病心肌缺血的作用.方法:200例行Holter检查的患者同时行冠状动脉造影,对Holter检测到的心肌缺血结果进行分类,并冠脉造影结果为金标准进行评价.结果:Holter检测冠心病心肌缺血的敏感性为56.4%,特异性为50%,假阳性率为50%,假阴性率为43.6%.缺血性ST段压低＞2 mm组冠脉病变支数及狭窄＞90%的血管支数均较ST段压低≤2 mm组明显增多(P＜0.01);ST段水平延长组中4例患者均有冠脉重度狭窄,ST段上抬组其中2例冠脉接近闭塞,2例冠脉无异常;ST段压低>2 mm组多支病变的例数较其他组明显增多(P＜0.01),冠脉造影阳性而Holter未监测到心肌缺血组狭窄＞90%血管支数明显减少(P＜0.01).结论:Holter对检出冠心病多支病变及冠脉严重狭窄患者所引起的心肌缺血具有较高的敏感性,并能判断心肌缺血的严重程度及检出伴随心肌缺血的心律失常.

摘要:目的:提高对先天性畸形--腔静脉后输尿管诊治的认识.方法:对1995年1月至2003年4月收治的14例腔静脉后输尿管患者,联合应用相关影像学检查明确诊断,治疗上采用输尿管离断复位矫形术,恢复输尿管正常通道.结果:14例患者术前均明确诊断,1例行肾切除术,13例经手术矫形复位.术后随访2个月至4年,右肾积水及输尿管上段扩张均明显减轻,输尿管通畅,吻合口无狭窄.结论:腔静脉后输尿管需联合各种影像学检查明确诊断,输尿管离断复位矫形术是主要的治疗方法.

摘要:目的:总结经颅视神经管减压治疗外伤性视神经损伤的经验.方法:分析2003年5月至2004年1月间收治的5例颅脑损伤合并视神经损伤患者的临床特点,比较经颅视神经管减压手术前后的视力变化.结果:患者受伤至手术时间为伤后6 h至14 d,均有视神经管骨折(7眼),视神经明显水肿(6眼),视力眼前手动至眼前指数,或无光感.5例(7眼)术后1个月视力均得到改善,无术后并发症.结论:经颅视神经管减压治疗外伤性视神经损伤安全有效,应尽早施术并灵活掌握手术指征.

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