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| 目的:利用原核重组表达技术,完成人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL,又称凋亡素2配体,Apo-2L)的中试.方法: 可溶性TRAIL编码基因插入改建的pBV220载体;在发酵过程中,控制溶解氧在30％～50％ ,30℃生长6 h,42℃诱导培养4 h;菌体上清行金属亲和层析.结果:发酵液中最终菌体密度D(600)达8.0(相当于每升发酵液含15 g湿菌体),TRAIL占菌体总蛋白的40％左右,含量超过0.6 g/L.其中,所表达的TRAIL 20％～30％在上清而直接有活性,70％～80％呈包涵体.上清用亲和层析一步使其纯度达70％以上;包涵体超声破菌后经两次洗涤,纯度达到80％以上. 结论:TRAIL在大肠杆菌中达到了高表达. |
| 关键词: 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、重组蛋白质、发酵、分批 补料 |
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| 基金项目: |
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| Higher density fermentation in preparation of recombinant soluble human TRAIL |
| 王梁华,朱玉平,娄永华,周劲松,彭玉珍,球谊,焦炳华 |
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