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| 目的:在大肠杆菌中高效表达融合基因AnxB1ScuPA.方法:利用PCR技术扩增AnxB1ScuPA的融合基因,克隆至原核表达载体pET-28a;转化几种不同的宿主菌(感受态细菌BL21、Rosetta、BL21-RIL),利用IPTG(终浓度为0.5 mmol/L)诱导蛋白表达,并对表达条件进行优化,根据凝胶扫描定量结果确定合适的宿主菌和诱导表达条件.结果:AnxB1ScuPA在具有稀有密码子tRNA的宿主菌BL21-RIL表达量较其他宿主菌为高.在菌液生长至D600＝0.8时,加入诱导剂IPTG至终浓度0.4 mmol/L,诱导0.5 h后加入利福平至终浓度150 μg/ml,可使蛋白AnxB1ScuPA的表达量提高至菌体总蛋白的36%.结论:通过选择具有稀有密码子tRNA的宿主菌BL21-RIL和优化诱导条件,使AnxB1ScuPA在大肠杆菌中得到高效表达. |
| 关键词: 膜联蛋白亚家族、单链尿激酶融合基因、稀有密码子、表达、利福平 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2004.01205 |
| 投稿时间：2004-03-08修订日期：2004-08-30 |
| 基金项目:国家自然科学基金(30271167)、上海市高等学校优秀青年教师后备人选计划(03YQHB105) |
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| Construction of AnxB1ScuPA expression vector and optimization of inducing conditions |
| 贺艳,颜宏利,陆一鸣,张毅,杨湘越,孙树汉 |
| (第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室,上海,200433) |
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