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| 目的:构建人源单克隆抗-HBs Fab-IFN-α表达载体,探讨该融合蛋白原核表达的可行性及其生物学活性.方法:用PCR体外扩增目的基因IFN-α,单酶点插入已含人源抗-HBsFab基因的载体,插入点位于轻链基因3'未端,利用酶切、PCR鉴定筛选正确插入的阳性克隆,转化大肠杆菌,挑选单克隆表达、纯化目的蛋白,用ELISA方法检测融合蛋白IFN-α的抗原性及其抗体亲和性,用WISH细胞检测IFN-α生物学活性.结果:利用插入了人源抗-HBs Fab基因及IFN-α基因的pBAD/gⅢA原核表达系统,成功表达了具生物活性的λ轻链与IFN-α的融合蛋白,其既具有与抗-HBs Fab相近的HBsAg的亲和力,又具有干扰素的活性.结论:λ轻链与IFN-α融合蛋白的成功表达表明,应用原核系统能够同时表达某些特异抗体和其介导的部分生物活性因子,是一种经济、有效的方法,为特异抗体及其介导融合蛋白的制备和临床应用提供了线索. |
| 关键词: 干扰素α、抗HBs抗体、融合蛋白 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2004.01299 |
| 投稿时间：2004-07-23修订日期：2004-11-22 |
| 基金项目:上海市科委资助项目(004319208) |
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| Construction and prokaryotic expression of fusion protein consisting of IFN-α and Fab of antibody against HBsAg |
| 陆慧琦,韩焕兴,安峰,叶伟民,曾万杰,薛菖 |
| (第二军医大学长征医院实验诊断科,上海,200003) |
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