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| 目的:在大肠杆菌中克隆表达人线粒体肌酸激酶广泛型亚型(uMtCK)的蛋白,免疫家兔制备抗uMtCK的多克隆抗体,检测胃肠肿瘤组织中uMtCK的表达.方法:采用RT-PCR从培养的肿瘤细胞(HeLa细胞)中成功扩增出1 062 bp的uMtCK基因片段,构建重组质粒pQE30-uMtCK,转化大肠杆菌表达酶融合蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE、Western印迹鉴定及酶活性测定.纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备了抗uMtCK多抗.免疫组化法检测59例胃及直肠肿瘤组织切片中uMtCK的表达.结果:RT-PCR扩增出的片段经酶切鉴定和测序证实为uMtCK的基因;在大肠杆菌M15中实现了高效、可溶性的融合表达.免疫家兔制备的抗uMtCK多抗经Western免疫印迹分析适合作uMtCK的进一步分析.免疫组化检测临床病理标本结果显示,59例胃及直结肠肿瘤标本uMtCK的阳性率为76.5%.结论:成功克隆了人uMtCK的编码基因,并将其在大肠杆菌中成功表达;制备了抗uMtCK多抗,免疫组化检测临床病理标本的结果提示uMtCK有助于胃肠肿瘤的诊断. |
| 关键词: 线粒体肌酸激酶、基因表达、胃肠肿瘤 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2004.01320 |
| 投稿时间：2004-07-23修订日期：2004-10-13 |
| 基金项目:上海市科委资助项目(034119939) |
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| Prokaryotic expression of human ubiquitous mitochondrial creatine kinase,preparation of its antiserum and clinical application |
| 张建,王爱华,顾鹏飞,于嘉屏 |
| (第二军医大学长征医院实验诊断科,上海,200003) |
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