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| 表皮生长因子受体蛋白酪氨酸激酶的表达、纯化及活性测定 |
| 李林,赵海丹,李国伟,陈静,沈旭,梅长林 |
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| (第二军医大学长征医院肾内科,上海,200003;中国科学院上海药物研究所,上海,200023) |
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| 目的:采用原核表达体系对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)受体型酪氨酸激酶(recep-tor tyrosine kinase,RTK)进行体外表达、纯化及活性鉴定.方法:以包含EGFR cDNA的pRK5质粒为模板,PCR选择扩增编码EGFR-RTK的cDNA片段,插入pQE30质粒后转染大肠杆菌M15.IPTG诱导表达融合蛋白,包涵体蛋白经复性后亲和层析法纯化,ELISA方法测定蛋白活性.结果:成功地将933 bp的EGFR-RTK cDNA片段插入载体pQE30中,构建了表达载体pQE30-RTK.经诱导在原核表达系统中以包涵体形式高效表达了相对分子质量为37 000的EGFR-RTK融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的65.2%.复性、纯化后的EGFR-RTK蛋白经ELISA检测,结果发现随着加入蛋白量的增加,酶促反应产物磷酸化酪氨酸的量也逐渐增加,两者具有线性关系.结论:本实验成功地利用原核表达系统表达了具有生物学活性的EGFR-RTK,较传统的昆虫细胞表达系统更为简便、经济. |
| 关键词: 表皮生长因子受体、酪氨酸激酶、基因表达 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2004.01353 |
| 投稿时间：2004-04-27修订日期：2004-09-06 |
| 基金项目:上海市科委资助项目(02JC14029)、国家自然科学基金(30170901)、科技部科技攻关项目(2002AA2Z3130) |
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| Expression, purification and bioactivity determination of epidermal growth factor receptor protein tyro-sine kinase |
| 李林,赵海丹,李国伟,陈静,沈旭,梅长林 |
| (第二军医大学长征医院肾内科,上海,200003;中国科学院上海药物研究所,上海,200023) |
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| Key words: |
