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| 重组hTRAIL腺病毒载体的构建及其体外抗肿瘤效应的初步观察 |
| 张瑞萍,云琳,金增强,倪海东,樊克兴,周倩,郭亚军,ZHANGRui-ping,YUNLin,JINZeng-qiang,NIHai-dong,FANKe-xing,ZHOUQian,GUOYa-jun |
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| 摘要: |
| 目的:利用AdEasy 载体系统构建含人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand, TRAIL)全长基因的重组腺病毒载体,并初步观察其体外对肿瘤细胞的杀伤作用.方法:利用 RT-PCR法从人外周血单个核细胞(PBMCs)克隆人TRAIL全长基因.将hTRAIL cDNA克隆入穿梭质粒pAdTrack-CMV中, 与腺病毒骨架结构pAdEasy-1共同转化入大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,重组子经酶切鉴定正确后,用脂质体转染入人胚肾293细胞中,包装获得重组腺病毒颗粒,Western blot 检测TRAIL蛋白的表达.将重组腺病毒颗粒体外感染对TRAIL敏感的3种人肿瘤细胞(淋巴瘤细胞Jurkat、前列腺癌细胞PC-3、宫颈癌细胞HeLa)后,进行AnnexinⅤ-FITC/PI染色流式细胞术检测、细胞基因组的DNA电泳和锥虫蓝染色,以观察TRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用.结果:利用RT-PCR法从人PBMCs中扩增出843 bp的cDNA片段,测序证实为人TRAIL基因.重组子经酶切鉴定正确,Western印迹证实感染TRAIL腺病毒的293细胞中有TRAIL蛋白的正确表达.将重组腺病毒颗粒体外感染HeLa、PC-3和Jurkat细胞,4 h后用AnnexinⅤ-FITC/PI染色,流式细胞术检测AnnexinⅤ+PI-细胞群分别占(41.15±3.12)％、(46.20±4.07)％、(38.56±3.45)％;24 h后,抽提Jurkat细胞的基因组进行DNA电泳,出现细胞凋亡时特有的DNA条带;36 h后用锥虫蓝对HeLa 、PC-3、Jurkat细胞染色,细胞死亡率分别为(75±5)％、(82±7)％、(70±5)％.结论:成功构建了hTRAIL腺病毒载体,体外感染HeLa 、PC-3、Jurkat肿瘤细胞后,能通过诱导细胞的凋亡而杀伤肿瘤细胞;为下一步的基因治疗和基础研究打下了基础. |
| 关键词: 人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因、腺病毒载体、凋亡、肿瘤 |
| DOI： |
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| 基金项目: |
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| Construction of Ad.hTRAIL and preliminary study on its in vitro anti-tumor effect |
| 张瑞萍,云琳,金增强,倪海东,樊克兴,周倩,郭亚军,ZHANG Rui-ping,YUN Lin,JIN Zeng-qiang,NI Hai-dong,FAN Ke-xing,ZHOU Qian,GUO Ya-jun |
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| Abstract: |
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| Key words: |
