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| 插入甘氨酸对HIV Tat-胸苷激酶融合蛋白生物学活性的影响 |
| 阚全程,赵杰,余祖江,江河清,李晓菲,KANQuan-cheng,ZHAOJie,YUZu-jiang,JIANGHe-qing,LIXiao-fei |
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| 目的:探讨插入甘氨酸(Gly)对HIV Tat-TK融合蛋白功能的影响.方法:利用基因重叠(gene splicing by overlap extension, gene SOEing)PCR技术,将不同长度的甘氨酸密码子(0、2、4、6个)插入HIV Tat-TK融合基因,经转染、鉴定证实后诱导表达,并经偶联Tat单克隆抗体的Sepharose CL-4B亲和层析柱纯化.4种HIV Tat-(Gly)n-TK系列融合蛋白(n=0、2、4、6)、HIV Tat蛋白、TK蛋白(1 μg/ml)分别与HepG2细胞在普通培养基共培养24 h后,间接免疫荧光检测各自透过细胞膜效率;在加入更昔洛韦的培养基培养3 d后,锥虫蓝染色计算细胞死亡率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:精确克隆出HIV Tat-(Gly)n-TK系列融合基因,成功表达HIV Tat-(Gly)n-TK系列融合蛋白以及HIV Tat和TK蛋白.HIV Tat-(Gly)n-TK系列融合蛋白与HIV Tat蛋白透过细胞膜的效率相似,但单独TK蛋白无法进入细胞;在含有更昔洛韦的培养基中HIV Tat-(Gly)4-TK融合蛋白致HepG2细胞凋亡率最高(14.77％),其余依次为HIV Tat-(Gly)2-TK融合蛋白(12.69％)、HIV Tat-TK(8.31％)、HIV Tat-(Gly)6-TK(4.36％)和HIV Tat 组(1.03％),组间均有显著性差异(P<0.05);细胞死亡率也发现类似的结果(分别为80.2％、65.4％、58.4％、56.7％、9.1％,组间有显著差异,P<0.05).结论:插入2、4、6个甘氨酸对HIV Tat-TK融合蛋白上游Tat蛋白的细胞融合穿透功能不产生影响,而对融合蛋白下游TK蛋白介导的更昔洛韦的细胞毒作用干扰较大,其中插入4个甘氨酸对TK蛋白介导的更昔洛韦的细胞毒作用影响最小. |
| 关键词: 甘氨酸、胸苷激酶、Tat、重组融合蛋白质类、细胞内化作用 |
| DOI： |
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| 基金项目: |
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| Influence of inserting glycines on biological properties of HIV Tat-(Gly)n- thymidine kinase fusion proteins |
| 阚全程,赵杰,余祖江,江河清,李晓菲,KAN Quan-cheng,ZHAO Jie,YU Zu-jiang,JIANG He-qing,LI Xiao-fei |
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| Abstract: |
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| Key words: |
