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| 目的:探讨影响红花扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)的各种因素,建立并优化红花AFLP反应体系,为研究红花品质性状的遗传基础及建立分子辅助标记育种的技术平台奠定基础.方法:CTAB法提取红花基因组DNA,用Beckman紫外可见分光光度计测定样品DNA浓度与纯度质量(D值);检测后分别进行一步法酶切与连接,或两步法酶切与连接,以检测哪种方法更适合;酶切连接产物设置不同的稀释倍数(5倍、10倍、15倍、20倍、25倍和30倍)进行预扩增,预扩增产物设置不同稀释倍数(10倍、25倍、50倍、75倍、100倍、150倍和200倍)进行选择性扩增;选择性扩增产物95℃变性8 min后,用6％的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,银染检测.结果:本研究建立适用于红花的AFLP体系:用乙醇沉淀DNA,建立的模板不含PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂,可被限制性内切酶MseⅠ和EcoRⅠ完全酶切;确定两步法进行酶切、连接,酶切时间为37℃ 3 h,连接16℃过夜,缓冲液采用NEB公司Buffer 2;预扩增产物最佳稀释倍数为25倍;选择性扩增最佳稀释倍数为75倍;上述建立的AFLP反应体系,PAGE电泳中主带清晰,没有降解.结论:本研究建立的反应体系适用于红花基因组DNA的AFLP研究. |
| 关键词: 红花、基因组、植物、扩增片段长度多态性 |
| DOI： |
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| 基金项目: |
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| Establishment and optimization of the amplified fragment length polymorphism reaction system of Carthamus tinctorins L. genome |
| 张阵阵,郭美丽,张军东,ZHANG Zhen-zhen,GUO Mei-li,ZHANG Jun-dong |
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| Key words: |
