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| 小鼠Retn基因siRNAs的设计及其稳定表达载体的构建 |
| 李雅慧;黎怀星;吴丹;施柯;蔡东联;孙树汉 |
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| (长海医院营养科,第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室,第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室,第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室,长海医院营养科,第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室 上海200433 ,上海200433 ,上海200433 ,上海200433 ,上海200433 ,上海200433) |
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| 摘要: |
| 目的 :设计小鼠 Retn基因特异性的 si RNAs,并构建一系列能在哺乳动物细胞内稳定表达这些 si RNAs的表达质粒 ,以便为在体外研究 Retn基因的功能打下基础。 方法 :(1 )设计并合成小鼠 Retn基因特异性的一组寡核苷酸片段 ,并克隆到 p Silencer EM 1 .0 - N eo载体 ;(2 )用电穿孔转染和 G4 1 8筛选等方法建立能稳定表达相应 si RNAs的一组 3T3- L1细胞克隆 ;(3)诱导细胞分化为脂肪细胞 ,并用 RT- PCR分析这些脂肪细胞内 Retn基因的 m RNA水平。 结果 :设计并构建了 4个小鼠Retn基因特异性的 si RNAs表达质粒 ,并证明其中的 2种质粒能在脂肪细胞内稳定表达相应的 si RNAs,显著地抑制了这些脂肪细胞内 Retn基因的 m RNA水平。 结论 :本研究设计并构建出的小鼠 Retn基因特异性的 si RNAs表达载体 ,所表达的 si R-NAs具有较强的 RNA干涉功能 ,为 Retn基因的功能研究奠定了实验基础 |
| 关键词: 小分子干涉RNA Retn基因 基因表达 |
| DOI： |
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