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| 发育、细胞生长、分化和癌变等过程与全基因组表达的选择性激活和时空调节密切相关，因此这些过程中基因表达模式的改变已成为当今生物学研究的热点之一。但是高等生物作为高度分化的系统，其差异基因表达分析往往需要大量纯化的同质细胞。尽管原位杂交/PCR能检测到未纯化细胞中的RNA或蛋白，但前提是目的细胞能通过可见的或位置标记加以确认，并且每次只能检测单个已知基因，从而限制了这些技术的应用范围。消减杂交、差异显示等技术虽可研究多基因表达的异同，但是需要大量的同质细胞提取RNA以制备探针。用PCR方法分析单个细胞中的基因组DNA或mRNA已成为可能，自20世纪90年代Brady等\[1\]成功从单个血细胞中扩增出所有mRNA以来，该技术已被迅速应用于单细胞水平上的基因表达研究。本研究在上述方法基础之上对各步条件加以优化改进，建立了稳定可靠的单细胞RT-PCR实验体系，包括序列非依赖性扩增全细胞mRNA的SC-Poly(A)PCR方法和引物特异性扩增目的基因的SC-RT-PCR方法。[第一段] |
| 关键词: 单细胞 逆转录 PCR |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2007.01028 |
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| 基金项目:国家自然科学基金（30571921）. |
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| Single cell RT-PCR: study of the experimental technique |
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