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  • 秦琴,张鹏,唐古生,沈茜*.可溶性HVEM-Ig融合蛋白的真核表达、鉴定、纯化及生物学活性检测[J].第二军医大学学报,2009,30(3):322-325    [点击复制]
  • .Eukaryotic expression, identification, and purification of soluble HVEM-Ig fusion protein and examination of its biological activity[J].Acad J Sec Mil Med Univ,2009,30(3):322-325   [点击复制]
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可溶性HVEM-Ig融合蛋白的真核表达、鉴定、纯化及生物学活性检测
秦琴,张鹏,唐古生,沈茜*
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(第二军医大学长海医院实验诊断科,上海 200433)
摘要:
目的:构建含鼠疱疹病毒侵入介质(herpesvirus entry mediator,HVEM)胞外区和IgG2a Fc段重组表达质粒,真核表达HVEM-Ig融合蛋白,鉴定、纯化,并检测其生物学活性。方法:通过RT-PCR从BALB/c小鼠脾细胞总RNA中扩增HVEM胞外区片段,WT-1杂交瘤细胞总RNA中扩增鼠IgG2a Fc片段,克隆入真核分泌型表达载体pSecTag2A,转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),表达产物用rProtein A凝胶进行亲和层析纯化,获得目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Western印迹分析。在单向混合淋巴细胞反应中加入不同浓度的HVEM-Ig融合蛋白作为处理组,同时以加入IgG蛋白的作为阴性对照和未处理的混合淋巴细胞作为空白对照,分别采用\[3H\]-TdR掺入法和ELISA法观察淋巴细胞增殖程度和细胞因子分泌情况。结果:成功构建重组质粒pSecTag2A-HVEM-Ig,表达及纯化HVEM-Ig融合蛋白,并对蛋白的理化性质进行了鉴定。\[3H\]-TdR掺入法和ELISA法结果显示:与对照组相比,该融合蛋白呈剂量依赖性抑制淋巴细胞增殖和IFN-γ、TNF-α、IL-2等细胞因子的分泌(P<0.05或P<0.01)。结论:成功构建了HVEM-Ig融合蛋白真核表达体系,融合蛋白具有预期的抑制淋巴细胞活性及细胞因子分泌的功能,为后续研究该分子在自身免疫和移植免疫反应中的机制奠定了基础。
关键词:  疱疹病毒侵入介质  免疫球蛋白G  融合蛋白  转染
DOI:10.3724/SP.J.1008.2009.0322
投稿时间:2008-09-27修订日期:2008-11-26
基金项目:国家自然科学基金(30500501).
Eukaryotic expression, identification, and purification of soluble HVEM-Ig fusion protein and examination of its biological activity
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Abstract:
Key words: