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| 针对人β-catenin基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定 |
| 姜永光1*,赵佳晖1,吴春婷2,罗勇1,贺大林3 |
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| (1.首都医科大学附属北京安贞医院泌尿外科,北京 100029;2.首都医科大学附属北京安贞医院呼吸科,北京 100029;3.西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,西安 710061) |
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| 摘要: |
| 目的:构建针对人β-catenin基因mRNA的shRNA真核表达载体,并转染HEK-293细胞,观察其对β-catenin的抑制效应。方法:化学合成用于产生针对β-catenin shRNA的对应DNA片段,将合成的寡核苷酸链退火形成双链,克隆入pSUPER真核表达载体,对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定,筛选阳性克隆。通过脂质体介导,把重组质粒转染HEK-293细胞,RT-PCR、蛋白质印迹法检测其对β-catenin mRNA和蛋白的干涉效果,MTT比色法检测β-catenin基因表达抑制的细胞和对照组细胞的增殖。结果:RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示转染组β-catenin基因的表达水平下调,MTT检测显示β-catenin表达抑制的细胞光密度值下降,细胞增殖受到了抑制（P<0.01）。结论:成功构建了针对人β-catenin基因的shRNA载体,转染HEK-293细胞后可抑制β-catenin基因的表达。 |
| 关键词: β-连环素 RNA干扰；shRNA HEK-293细胞 上皮细胞间质转化态 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2009.0965 |
| 投稿时间：2009-01-10修订日期：2009-07-16 |
| 基金项目:国家自然科学基金(30872934),北京市自然科学基金(5072019). |
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| Construction and identification of shRNA eukaryotic vector targeting human β-catenin |
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| Abstract: |
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| Key words: |
