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| 目的 构建人亲环素A（CypA）基因的原核表达载体，诱导表达、纯化蛋白，制备抗体，为进一步研究其生物学作用奠定基础。方法 以人肺癌组织总RNA为模板，RT-PCR扩增CypA基因片段，克隆到pMD18-T载体中。扩增产物与原核表达载体pET30a(+)连接，构建表达质粒pET30a-CypA，转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达，用镍树脂亲和层析柱High-Affinity Ni-IDA Resin纯化表达产物，SDS-PAGE 检测纯化蛋白。用获得的蛋白免疫大白兔，制备抗CypA蛋白多抗，采用蛋白印迹法检测抗体特异性。结果 成功构建了CypA的原核表达载体，经大肠杆菌诱导表达、镍亲和层析柱纯化，得到纯度达80.2%的融合蛋白，免疫大白兔后得到多抗血清。蛋白印迹结果显示此多克隆抗体能与CypA蛋白特异性结合。结论 成功获得CypA纯化蛋白及CypA多克隆抗体，为进一步研究CypA在肺癌中的作用机制奠定了基础。 |
| 关键词: 亲环素A 原核表达 分离纯化 亲和层析 多克隆抗体 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2010.0445 |
| 投稿时间：2009-03-17修订日期：2010-01-21 |
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| Prokaryotic expression, purification and polyclonal antibody preparation of Cyclophilin A |
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| (College of Public Health,Zhengzhou University) |
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