MicroRNA基因递送系统抗激素非依赖型前列腺癌增殖作用研究
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中国人民解放军第二军医大学第一附属医院长海医院,上海交通大学附属第一人民医院,中国人民解放军第二军医大学第一附属医院长海医院,上海中医药大学附属岳阳医院药剂科,中国人民解放军第二军医大学第一附属医院长海医院,中国人民解放军第二军医大学第一附属医院长海医院,中国人民解放军第二军医大学第一附属医院长海医院

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国家自然科学基金 (81302212, 81372762, 81272819).


MicroRNA delivery system inhibits proliferation of androgen-independent prostate cancer
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Department of Pharmacy, Second Military Medical University

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    摘要:

    目的 采用支化的聚乙烯亚胺(BPEI)、线型聚乙烯亚胺(LPEI)和树枝状聚合物聚酰胺-胺(PAMAM)与具有抑制激素非依赖型前列腺癌细胞PC3增殖的microRNA(miRNA)-15a和miRNA-16-1质粒结合,构建了miRNA基因递送系统。考察形成的3种纳米复合物的粒径、zeta电位、细胞内摄取,以及对PC3细胞的抑制作用。方法 利用粒径分析仪测定形成的3种纳米复合物的粒径和电位,凝胶电泳实验测定3种材料对miRNA的结合能力; 利用FAM标记的NC-miRNA考察PC3细胞对3种复合物的摄取情况;通过CCK8 法测定3种材料与miRNA-15a和miRNA-16-1形成的复合物对PC3细胞的抑制作用;PCR法测定3种材料与miRNA-15a和miRNA-16-1结合后对PC3细胞中Bcl-2、Cylin D1和Wnt3a表达的阻滞作用。结果 BPEI、LPEI和PAMAM与miRNA可结合形成稳定的纳米级复合物,在N/P=5时,PC3细胞对BPEI/miRNA-FAM的摄取高于LPEI/miRNA-FAM和PAMAM/miRNA-FAM,差异具有统计学意义(P<0.05)。BPEI、LPEI和PAMAM都可以携带miRNA-15a和miRNA-16-1进入PC3细胞,并且阻滞PC3细胞中Bcl-2、Cylin D1和Wnt3a蛋白的表达。结论 BPEI、LPEI和PAMAM包裹miRNA-15a和miRNA-16-1可对激素非依赖型前列腺癌细胞PC3细胞产生抑制作用,并可以有效阻滞PC3细胞中Bcl-2、Cylin D1和Wnt3a蛋白的表达。

    Abstract:

    Objective To prepare a microRNA (miRNA) delivery system using the branched polyethyleneimine (BPEI), linear polyethylenimine (LPEI) and polyamidoamine dendrimers (PAMAM) loaded with miRNA-15a and miRNA-16-1, which can inhibit prostate cancer PC3 cell proliferation, and to examine the zeta potential, intracellular uptake, and the inhibition effect on PC3 cells of the three constructed nano-complexes. Methods Particle size analyzer was used to determine the size and potential of the three kinds of nano-complexes, and the miRNA affinity capability of them was determined by agarose gel electrophoresis retardation assay. The uptake efficiency of the nano-complexes by PC3 cells was examined by NC-miRNA labeled with FAM. CCK8 method was used to determine the inhibitory effect of the nano-complexes loaded with miRNA-15a and miRNA-16-1 against PC3 cells, and PCR was used to analyze their inhibitory effect on expression of Bcl-2, Cylin D1 and Wnt3a gene in PC3 cells. Results BPEI, LPEI and PAMAM loaded with miRNA could form stable nano-complexes. When N/P=5, the intracellular uptake of BPEI/miRNA-FAM by PC3 cells was significantly higher than that of LPEI/miRNA-FAM and PAMAM/miRNA-FAM (P<0.05). BPEI, LPEI and PAMAM could all carry miRNA-15a and miRNA-16-1 into PC3 cells and block Bcl-2, Cylin D1 and Wnt3a expression in PC3 cells. Conclusion BPEI, LPEI and PAMAM loaded with miRNA-15a and miRNA-16-1 can suppress proliferation of prostate cancer PC3 cells and block Bcl-2, Cylin D1 and Wnt3a expression.

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  • 收稿日期:2014-07-10
  • 最后修改日期:2014-10-14
  • 录用日期:2014-12-19
  • 在线发布日期: 2015-02-12
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