【立论依据】 脑瘫是新生儿尤其是早产儿最常见最严重的并发症之一,缺血缺氧(HI)是主要原因,而脑白质是其主要损伤部位,其中的晚期少突胶质细胞前体(OPCs)是主要受损细胞。脑黄金DHA的主要成分(ω-3多不饱和脂肪酸, ω-3)对胎儿及婴儿的大脑特别脑白质的生长发育极为重要。但ω-3对HI所致脑瘫是否具有防治作用目前还不清楚,深入探究其在HI脑白质损伤中的作用,对新生儿脑瘫的及时干预有着重要意义。 【设计思路】 体外观察ω-3对培养OPCs缺氧条件下增殖、分化和凋亡等的作用;体内观察ω-3对HI模型脑白质损伤及动物行为学的影响,得出ω-3对新生儿HI所致脑瘫的防治作用。 【实验内容】 (1)ω-3对缺氧后OPCs的作用:体外培养OPCs,制作缺糖缺氧(OGD)模型,给予ω-3预处理以及缺氧后给药,LDH和MTT检测细胞受损和活性,BrdU、Ki67和PCNA免疫荧光观察细胞增殖,TUNEL染色显示细胞凋亡,免疫荧光、蛋白质印迹和q-PCR检测细胞PDGFR-α、A2B5、NG2、CNPase、PLP和MBP等少突胶质细胞相关蛋白和mRNA的表达。(2)ω-3对缺氧后脑白质损伤的影响:制备新生大鼠HI模型,预给予或缺氧后补充ω-3,不同时相点取材,免疫荧光、蛋白质印迹和q-PCR检测脑白质中PDGFR-α、A2B5、NG2、CNPase、PLP和MBP等少突胶质细胞相关蛋白和mRNA的表达,快蓝和Fluomeylin染色显示白质髓鞘的情况,BrdU、Ki67和PCNA免疫荧光染色检测细胞的增殖,TUNEL染色显示细胞的凋亡。(3)ω-3对缺氧模型大鼠成年后行为学的影响:应用旷场、斜杆、Y迷宫和Morris水迷宫等行为学测试,检测模型鼠成年后的运动能力和学习记忆能力。取材观察大脑重量、大脑的白、灰质分布以及神经反射速度。 【材料】 新生大鼠、缺氧罐、ω-3、各种细胞培养、分子生物学和免疫组织化学试剂。 【可行性】 以前研究表明ω-3对创伤后脑白质损伤具有保护作用,因此有理由推测ω-3对缺氧造成的脑白质损伤及少突胶质细胞损伤具有防护作用;指导教师一直进行脑缺氧方面的研究,可以提供指导和帮助。 【创新性】 本项目创新将ω-3引入新生儿脑瘫的防治研究,以期为HI性脑损伤的防治提供新措施。