【立论依据】 顺铂是目前公认一线抗癌药物,被广泛用于治疗肺癌、卵巢癌等恶性肿瘤。然而,顺铂能诱导耳蜗内TRPV1的高表达,进而促进ROS的过量生成并进一步引发脂质过氧化,最终使耳蜗细胞凋亡,导致听力丧失。已知熊果酸具有很强的抗氧化作用,可有效防护H₂O₂对HEI-OC1听觉细胞的破坏;并可有效抑制TRPV1的激活以发挥止咳作用。据此我们推测,熊果酸可通过抑制顺铂所致TRPV1的高表达、防止脂质过氧化,从而有效拮抗顺铂的耳毒性。 【设计思路】 应用免疫组化和免疫荧光染色、蛋白质印迹技术,结合听脑干反应(ABR)测试,研究熊果酸对顺铂所致耳蜗氧化损伤的防护作用及其机制;并选用人卵巢癌细胞株SKOV3进行体外培养,观察熊果酸对顺铂抗肿瘤作用的影响,为临床防护顺铂耳毒性提供新思路。 【实验内容】 (1)建立小鼠顺铂耳毒性模型,通过ABR测试和荧光标记,初步探明熊果酸对顺铂耳毒性的防护作用;并且选用SKOV3细胞株进行体外培养,观察熊果酸对顺铂抗肿瘤作用的影响,明确熊果酸的临床应用可行性。(2)建立小鼠顺铂耳毒性模型,应用ABR测试以评价听功能,免疫组化和免疫荧光染色、蛋白质印迹技术检测TRPV1、脂质过氧化产物4-HNE和caspase-3在耳蜗的表达,探讨熊果酸发挥防护作用的可能机制。 【材料】 成年BALB/c小鼠、人卵巢癌细胞株SKOV3、顺铂、熊果酸、抗TRPV1、4-HNE和caspase-3抗体、蛋白质印迹 检测相关试剂、细胞培养相关试剂等。 【可行性】 (1)本团队成员已熟练掌握本研究所需实验技术。(2)指导教师多年从事药物耳毒性机制与防护研究,可给予理论指导、仪器和技术支持。(3)预实验结果显示,熊果酸可有效拮抗顺铂的耳毒性,并且熊果酸不影响顺铂的抗肿瘤作用。 【创新性】 本研究首次阐明熊果酸可有效拮抗顺铂对小鼠耳蜗的氧化损伤,并进一步揭示了其发挥作用的可能机制,为临床防护顺铂耳毒性提供了实验依据。