【立论依据】 肥胖易发肝纤维化并且大多数肥胖病人会有高瘦素血症。脂肪因子瘦素在肝纤维化的发生中发挥着独一无二的作用。在肝纤维化的发生中肝星状细胞(HSCs)的激活是一个关键的步骤而且固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)能够抑制HSCs的激活。在已有的研究中,Leptin可以抑制SREBP-1c的表达而导致肝纤维化,β-catenin途径可以调节跟脂肪细胞分化有关的基因转录调节因子的表达,因此我们旨在认清β-catenin途径能否介导在小鼠肝纤维化中瘦素抑制SREBP-1c表达的作用。 【设计思路】 确认Leptin与β-catenin信号通路的关系;研究β-catenin是否介导Leptin诱导SREBP-1c表达的降低;β-catenin信号通路对SREBP-1c表达的影响。 【实验内容】 小鼠肝纤维化模型制备、HSCs分离与培养、蛋白质印迹分析、mRNA分离和real-timePCR检测、质粒的制备和质粒转染检测分析、各蛋白表达的免疫组化及免疫荧光分析、肝纤维化组织检测、抑制剂的使用、荧光素酶的检测。 【材料】 Leptin,MaleC57BL/6Job/obmice,Ad.DKK-1,Ad.Fc,HSCs,SREBP-1c,primers,plasmid pSREBP1c-Luc,Plasmid pdncatenin,plasmid pwtcatenin,plasmid Plxre-luc,normal serum。 【可行性】 肝纤维化与HSCs的激活密不可分,而HSCs的激活是和瘦素水平的上调以及连续的SREBP-1c表达的下调联系在一起的;相关实验表明β-catenin信号转导途径可以调节脂肪细胞的增殖与分化也参与了胆管结扎导致的肝纤维化,所以就很有必要去研究肝纤维化中Leptin、β-catenin以及SREBP-1c三者之间的关系。 【创新性】 确定β-catenin信号传导通路在Leptin诱导肝纤维化中的作用,以及β-catenin信号通路对SREBP-1c表达的影响,可为以瘦素作为靶点治疗肝纤维化提供新的见解。