【立论依据】 OCT4与SOX2是两个在癌症进展中重要的转录因子,在前列腺癌中呈现高表达状态,报道显示OCT4可以通过调控STAT3调节细胞生存,我们之前的研究显示SOX2能够在前列腺癌细胞中上调AKT通路活性,但OCT4/SOX2二者是如何相互作用调节彼此表达的机制并不完全清楚。报道称二者均能被miR-145调控,二者是否能够竞争性的结合miR-145,通过ceRNA途径相互调控彼此的表达?继而调节前列腺细胞生存?我们将在裸鼠模型及临床标本中验证,上述机制如能证实将给PCa治疗提供新的思路和靶点。 【设计思路】 以Dicer缺陷细胞作为阴性对照,在前列腺癌细胞中下调/过表达OCT4/SOX2 3'UTR,观察二者表达变化,同时检测细胞增殖及侵袭情况及相关信号通路变化。 【实验内容】 通过qRT-PCR、蛋白质印迹和免疫组织化学(IHC)方法,检测临床标本及常见前列腺癌细胞系OCT4与SOX2的表达;通过报告基因和RNA免疫共沉淀验证miR-145调控OCT4/SOX2表达;使用siRNA干扰OCT4/SOX2表达,RNA及蛋白水平观察其表达的相互影响;过表达OCT4/SOX2 3'UTR,RNA及蛋白水平观察其表达的相互影响。采用上述技术控制表达后,检测细胞增殖及侵袭情况同时检测信号通路变化。裸鼠皮下注射及尾静脉注射OCT4/SOX2 3'UTR过表达及空细胞,分别观察肿瘤细胞的增殖和转移能力。 【创新性及可行性】 OCT4与SOX2是两个在干细胞及癌症进展中重要的转录因子;OCT4/SOX2二者是如何相互作用维持彼此表达的机制并不清楚,我们发现二者均能被miR-145调控,而miR-145是不是作为一个中介因子使得二者能够相互调控彼此的表达?SOX2、OCT4作为IPSC Cocktail的重要组分,在促进IPSC的过程中,是不是亦存在这样的相互作用?如果该相互调节被证实,不但对于肿瘤学是一个重要的进展,更或能改变干细胞的研究思路。目前临床上用于治疗癌症的常规化学治疗药物均存在不同的缺点,若OCT4和SOX2能够通过miR-145相互调控进而影响肿瘤细胞生物学行为,即有以此为靶点设计药物的可能,为治疗提供一个新的思路。