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| 腺病毒介导的血管内皮生长因子体外靶向性转染心肌细胞 |
| 张裕东,张宝仁,梅举,陈兰英,刘红,黄盛东,钱其军,吴红平,李林芳,肖海波,王晓伟 |
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| 目的:构建以鼠心肌轻链蛋白基因(mlc-2v)为启动子、携带人血管内皮生长因子hVEGF165基因的重组腺病毒载体,检测该重组腺病毒载体对心肌细胞转染的靶向性.方法:酶切腺病毒载体PDC315自身启动子CMV,构建腺病毒载体PDC317,分别接入hVEGF165、mlc-2v基因,构建腺病毒载体PDC-mlc-hVEGF165.鉴定正确后,将PDC-mlc-hVEGF165与Lipofectamine共转染至293细胞,经同源重组获得以mlc-2v为启动子、携带hVEGF165基因的重组腺病毒Ad-mlc-hVEGF165,同步构建无靶向性的重组腺病毒Ad-hVEGF165.扩增并测定滴度后,Ad-hVEGF165、Ad-mlc-hVEGF165分别转染体外培养的心肌细胞、骨骼肌细胞及平滑肌细胞,利用ELISA、Western印迹分析等方法检测Ad-mlc-hVEGF165转染心肌细胞的靶向性.结果:构建的病毒正确,病毒滴度为2.8×109 pfu/ml.转染3 d后,Ad-hVEGF165组在各培养细胞的上清液及细胞内均检测到VEGF的表达,而Ad-mlc-hVEGF165组仅在心肌细胞中有VEGF的表达,且Ad-mlc-hVEGF165组心肌细胞分泌的VEGF要少于Ad-hVEGF165组.结论:成功构建了以mlc-2v为启动子、携带人VEGF基因的重组腺病毒Ad-mlc-hVEGF165;该重组载体能体外靶向性转染心肌细胞并使之表达VEGF. |
| 关键词: |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2004.00759 |
| 投稿时间：2004-02-06修订日期：2004-05-24 |
| 基金项目:国家自然科学基金(39970735) |
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| Adenovirus-mediated vascular endothelial growth factor transfecting cardiomyocyte in vitro |
| 张裕东,张宝仁,梅举,陈兰英,刘红,黄盛东,钱其军,吴红平,李林芳,肖海波,王晓伟 |
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| Abstract: |
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| Key words: |
