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| SMART技术构建白念珠菌全长cDNA文库 |
| 徐铮,曹永兵,高平挥,张军东,曹颖瑛,唐榕,应康,姜远英 |
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| (第二军医大学药学院药理学教研室,上海,200433;上海联合基因集团科技研究院,上海,200092) |
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| 目的:为克隆和研究白念珠菌新耐药相关基因,应用SMART(switching mechanism at 5'end of RNA transcript)技术,快速构建高质量的白念珠菌全长cDNA文库.方法:采用TRIzol试剂提取不同生长期、不同药物刺激的白念珠菌SC5314的总RNA,经Oligotex试剂盒纯化得到mRNA.利用含Sfi Ⅰ B酶切位点的CDSⅢ/3'PCR引物合成cDNA第1条链,而含SfiⅠA酶切位点的SMART寡核苷酸作为cDNA第1条链在mRNA 5'端延伸出去的模板.LD-PCR合成双链cDNA,经SfiⅠ酶切和过柱分级分离后,与pBSF质粒进行连接,随后转化大肠杆菌,构建成全长cDNA文库.测序验证部分插入cDNA的全序列,计算全长性比例.结果:构建好的文库中含有约1.1×106的重组子,重组率为97.6%,插入cDNA长度为750～3000bp,且大部分在1.5kb以上.测定60个克隆的全序列,经生物信息学分析,全长性比例在50%以上.结论:成功构建了白念珠菌全长cDNA文库,为进一步筛选、克隆白念珠菌耐药相关基因奠定了基础. |
| 关键词: 全长cDNA文库、白念珠菌、抗药性、SMART |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2004.01090 |
| 投稿时间：2004-03-17修订日期：2004-05-25 |
| 基金项目:国家自然科学基金(30200012,30300442)、上海市重点基础研究项目(03JC14006) |
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| Construction of full-length cDNA library of Candida albicans using SMART technology |
| 徐铮,曹永兵,高平挥,张军东,曹颖瑛,唐榕,应康,姜远英 |
| (第二军医大学药学院药理学教研室,上海,200433;上海联合基因集团科技研究院,上海,200092) |
| Abstract: |
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| Key words: |
