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| 目的:建立肌肉内烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR )ε亚单位mRNA表达水平的荧光定量检测方法,观察周围神经损伤后肌肉内nAChR ε亚单位mRNA表达的变化.方法:构建克隆载体pMD18-T-ε作为定量模板,进行TaqMan实时荧光定量PCR反应,同时测定该法的灵敏性、特异性和重复性.同法检测大鼠股薄肌支配神经损伤修复后不同时间肌肉标本内nAChR ε亚单位mRNA表达的变化.结果:用该方法检测nAChR ε亚单位mRNA表达,其线性检测范围为6个数量级,最低检测下限为1×102拷贝,最高检测上限为1×107拷贝.大鼠股薄肌支配神经损伤后,与对照组相比ε亚单位mRNA表达的拷贝数先增加后减少,在术后第3周降到最低后又逐渐增高,但到术后30周仍处于低水平(P<0.01).结论:采用TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测nAChR ε亚单位mRNA的表达水平具有灵敏度高、特异性强、重复性好、线性检测范围宽的优点.神经损伤再生的晚期ε亚单位mRNA表达水平较损伤前有所降低. |
| 关键词: 烟碱型乙酰胆碱受体ε亚单位、荧光定量逆转录聚合酶链反应、周围神经损伤、基因表达和调控 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2005.00013 |
| 投稿时间：2004-07-15修订日期：2004-11-19 |
| 基金项目:上海市优秀学科带头人项目(1999076)、上海市科技发展基金(024119057) |
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| Expression of acetylcholine receptor ε subunit gene in muscle following nerve injury and regeneration |
| 张盈帆,江华,林子豪,蔡在龙,吴包金 |
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