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| 目的 :对目前常用的致突菌株和PCR随机突变方法进行评价。 方法 :用单链抗体表达质粒转化致突菌株XL1 Red ,转种传代 7d ,选取克隆测定DNA序列。用错配PCR在相同基因中引入突变 ,比较不同Mg2 + 浓度、不同dNTP的浓度、不同dITP等条件下所致突变率。 结果 :在XL1 Red菌株中转种 7d(约 5 0代 )后 ,测定突变率 2 %。其突变类型有明显偏向性 ,以A/T的突变为主 ,转换多于颠换。 结论 :用致突菌株引入的突变率过低 ,不适用于抗体亲和力成熟 ,错配PCR在合适条件下可达到 2 %以上突变率 ,适用于随机突变抗体库的构建 ,但其突变类型有偏向性 ,应予以考虑。 |
| 关键词: 聚合酶链反应 突变 致突菌株 ScFv |
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