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| 目的 :以内部核糖体进入位点 (IRES)序列连接鼠 TGF-β1 和 PL P- Ig 2基因 ,构建重组腺病毒双表达载体。方法 :采用常规分子生物学方法 ,分别从 Con A刺激的小鼠脾细胞和 WT- 1杂交瘤细胞抽提总 RNA,克隆鼠 TGF- β1 基因和 Ig重链Fc基因 ;将编码 PL P1 39- 1 51 的 DNA与信号肽设计在引物上 ,经过 2次克隆 ,形成 PL P- Ig。与 TGF-β1 以 IRES序列相连接后 ,经穿梭载体与可调控性腺病毒载体骨架连接 ,鉴定后在 HEK2 93细胞包装。获得高滴度病毒后 ,采用 EL ISA方法鉴定 TGF- β1基因的表达 ;Western印迹鉴定 PL P- Ig的表达。 结果 :该双表达重组腺病毒载体经测序、限制性内切酶酶切分析、PCR等鉴定 ,与预期结果一致 ;病毒感染细胞分别经 EL ISA和 Western印迹检测后证实 TGF-β1 和 PL P- Ig得到了独立表达。结论 :构建的可调控性鼠 TGF-β1 和 PL P- Ig重组腺病毒双表达载体的独立表达 ,为后续基因治疗研究奠定了基础 |
| 关键词: 内部核糖体进入位点 转化生长因子β 蛋白脂 基因表达 重组腺病毒载体 |
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