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| 重组人中期因子的原核表达、纯化及生物学活性鉴定 |
| 钱海华;康晓燕;殷正丰;王翠红;李瑾;吴孟超 |
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| (第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤实验室,第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤实验室,第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤实验室,第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤实验室,第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤实验室,第二军医大学东方肝胆外科医院分子肿瘤实验室 上海200438 ,上海200438 ,上海200438 ,上海200438 ,上海200438 ,上海200438) |
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| 摘要: |
| 目的 :表达和纯化具有生物学活性的重组人中期因子蛋白。方法 :应用 RT- PCR从人肝细胞癌组织总 RNA中扩增中期因子 c DNA,将其克隆到表达载体 p ET- 2 4 a,在大肠杆菌中诱导表达 ,经肝素 -琼脂糖亲和层析柱纯化 ,应用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western印迹和细胞增殖试验对纯化产物进行分析鉴定。 结果 :构建的重组质粒 p ET- HMK能在大肠杆菌中高表达 ,诱导表达的蛋白主要存在于包涵体中 ,经肝素 -琼脂糖柱亲和层析后纯化产物呈单一条带 ,特异性抗体反应证实是重组人中期因子 ,细胞增殖试验显示其能有效促进 NIH 3T3细胞生长 ,并且具有剂量依赖性。结论 :原核系统表达的重组人中期因子蛋白纯品具有刺激细胞增殖的活性 |
| 关键词: 中期因子 原核表达 亲和层析 细胞增殖 |
| DOI： |
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