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| 目的:表达纯化可卡因-苯丙胺调节转录肽（CART）及其突变体，观察其对大鼠进食行为的影响。方法:PCR扩增CART活性片段CART55-102 cDNA，构建表达CART55-102原核表达载体，并对其68位和94位半胱氨酸残基突变，构建表达CART55-102（Cys68Ser）和CART55-102（Cys94Ser）原核表达菌株，经IPTG诱导表达后，亲和层析纯化3种小肽；行为学技术检测原核表达小肽对大鼠进食行为的影响。结果:获得的重组CART55-102及其突变体的纯度在95%以上，产物得率约75%；CART55-102可显著抑制饥饿大鼠的进食行为，而68和94位突变体对饥饿大鼠的进食行为无明显影响。结论:原核表达系统可以成功制备高纯度CART活性小肽和突变体，68位和94位突变导致CART抑制进食的作用消失。 |
| 关键词: 可卡因-苯丙胺调节转录肽 突变体 基因表达 纯化 二硫键 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2009.0319 |
| 投稿时间：2008-08-29修订日期：2008-10-21 |
| 基金项目:国家自然科学基金(30271258，3067244)；国家重点基础研究项目(“973”计划，2003CB515407)；上海市重点基金（06JC14008）. |
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| Expression, purification and bioactivity observation of cocaine and amphetamine regulated transcript and its mutants |
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