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| 目的:构建含鼠疱疹病毒侵入介质（herpesvirus entry mediator,HVEM）胞外区和IgG2a Fc段重组表达质粒，真核表达HVEM-Ig融合蛋白，鉴定、纯化，并检测其生物学活性。方法:通过RT-PCR从BALB/c小鼠脾细胞总RNA中扩增HVEM胞外区片段，WT-1杂交瘤细胞总RNA中扩增鼠IgG2a Fc片段，克隆入真核分泌型表达载体pSecTag2A，转染中国仓鼠卵巢细胞（CHO），表达产物用rProtein A凝胶进行亲和层析纯化，获得目的蛋白，并进行SDS-PAGE和Western印迹分析。在单向混合淋巴细胞反应中加入不同浓度的HVEM-Ig融合蛋白作为处理组，同时以加入IgG蛋白的作为阴性对照和未处理的混合淋巴细胞作为空白对照，分别采用\[3H\]-TdR掺入法和ELISA法观察淋巴细胞增殖程度和细胞因子分泌情况。结果:成功构建重组质粒pSecTag2A-HVEM-Ig，表达及纯化HVEM-Ig融合蛋白，并对蛋白的理化性质进行了鉴定。\[3H\]-TdR掺入法和ELISA法结果显示：与对照组相比，该融合蛋白呈剂量依赖性抑制淋巴细胞增殖和IFN-γ、TNF-α、IL-2等细胞因子的分泌(P<0.05或P<0.01)。结论:成功构建了HVEM-Ig融合蛋白真核表达体系，融合蛋白具有预期的抑制淋巴细胞活性及细胞因子分泌的功能，为后续研究该分子在自身免疫和移植免疫反应中的机制奠定了基础。 |
| 关键词: 疱疹病毒侵入介质 免疫球蛋白G 融合蛋白 转染 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2009.0322 |
| 投稿时间：2008-09-27修订日期：2008-11-26 |
| 基金项目:国家自然科学基金（30500501）. |
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| Eukaryotic expression, identification, and purification of soluble HVEM-Ig fusion protein and examination of its biological activity |
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