| 摘要: |
| 目的:建立逆转录病毒介导的MCPH1基因RNA干扰表达体系并观察其在宫颈癌细胞(HeLa)中对MCPH1表达的影响。方法: 将人MCPH1基因RNA干扰双链DNA片段重组到逆转录病毒质粒pSilencer5.1-H1 Retro中,构建携带人MCPH1基因RNA干扰逆转录病毒载体pSiRNA-MCPH1,经PT67细胞包装后,产生的重组逆转录病毒感染宫颈癌细胞株HeLa细胞,并用嘌呤霉素筛选产生稳定的细胞克隆,用RT-PCR和Western印迹检测细胞中MCPH1 mRNA和蛋白表达的变化。结果:重组pSiRNA-MCPH1质粒经测序鉴定正确；重组逆转录病毒感染HeLa细胞后用嘌呤霉素筛选出稳定的细胞克隆；RT-PCR和Western印迹检测人MCPH1 mRNA和蛋白表达水平明显低于阴性对照组和未干扰组。结论:携带人MCPH1基因RNA干扰双链DNA片段的逆转录病毒感染HeLa细胞后能明显抑制MCPH1 mRNA和蛋白表达,为进一步研究MCPH1在宫颈癌中的作用奠定了基础。 |
| 关键词: MCPH1 RNA干扰 逆转录病毒载体 宫颈肿瘤 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2009.0450 |
| 投稿时间：2008-11-06修订日期：2009-02-12 |
| 基金项目:国家自然科学基金(30800410). |
|
| Construction and identification of recombinant retroviral vector expressing shRNA targeting human MCPH1 gene |
|
| () |
| Abstract: |
|
| Key words: |
