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| [摘要]目的获得具有较高纯度和酶活性的烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶-1(Nmnat1),为进一步对其功能及调控的研究奠定基础。方法在大肠杆菌中进行Nmnat1表达的条件优化,采用Ni-NTA 亲和层析法对目的蛋白进行纯化,并通过酶联荧光法测定酶活性。结果BL21-CondonPlus (DE3)-RIL为适宜的宿主菌,优化的蛋白表达条件为: 在2×YT培养基(37 μg/ml氯霉素和75 μg/ml卡那霉素)中于28℃、0.5 mmol/L IPTG(isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside, 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导8 h。纯化获得的Nmnat1蛋白具有较高的纯度和酶活性。结论适宜的宿主菌对Nmnat1蛋白的高效表达至关重要,进行表达条件优化后可获得大量具有较高纯度和酶活性的目的蛋白。 |
| 关键词: 烟酰胺单核苷酸腺苷转移酶 表达 纯化 酶活性 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2010.01251 |
| 投稿时间：2010-04-20修订日期：2010-09-12 |
| 基金项目:国家重点基础研究发展计划课题(“973计划 ”,2009CB521902),国家“重大新药创制”科技专项(2009ZX09303-002),上海市优秀学科带人计划(10XD1405300),上海市血管生物学重点实验室开放课题基金(GXY2009001001). |
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| Expression, purification, and enzymatic activity assay of nicotinamide mononucleotide adenylyltransferase |
| L Xia-qun,ZHANG Ruo-yu,XU Xue-wen,GUAN Yun-feng,MIAO Chao-yu |
| (Department of Pharmacology,School of Pharmacy,Second Military Medical University,Shanghai 200433) |
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