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| 【立论依据】 地方性氟中毒(慢性氟中毒)是一种严重危害人体健康的地球化学性疾病,疾病发生与人群长期居住的地理环境条件有关。地方性氟中毒可导致全身多系统的器官发生损害,严重氟中毒患者遭受多脏器损害的病痛,甚至丧失劳动及生活能力。过去对地方性氟中毒表现认为主要以牙和骨损害为主,有研究者提出非骨性器官的损害很有可能是早于牙齿和骨骼损害发生的。在对各非骨性器官氟暴露影响的研究过程中,研究者发现在氟暴露早期或不同氟暴露剂量相同研究指标改变存在差异,即有学者提出的氟对细胞影响的双相作用。目前,对于地方性氟中毒的发生机制尚未完全清楚,针对地方性氟中毒发病机制的深入研究对疾病的临床治疗与预防治理都将具有重要意义。 【设计思路】 临床对于地氟病患者的诊断依赖于影像学可见的骨骼损害及肉眼可观察到的氟斑牙,而对地方性氟中毒病区人群的研究发现,病区中存在相当数量的人群具有机体不适症状但并未表现出氟骨症或仅有轻中度的氟斑牙。这一现象表明,在染氟早期机体可能已有轻度损害但牙齿和骨骼损害尚未出现。基于这一思路,本课题设计对染氟初期实验动物及体外培养细胞进行各非骨性器官信号转导激酶及氧化应激酶类检测,力图寻找到在慢性氟中毒早期能够较为稳定改变的指标,并将这些指标组合应用于试剂盒的开发,对达不到氟中毒诊断标准的但具有临床症状的患者进行检测诊断,以期达到早期采取措施进行防治目的。 【实验内容】 (1) 对氟暴露后各组织器官的敏感改变指标进行筛选。课题研究方案涉及病理学、生物化学和分子生物学领域多种研究技术。应用饮水中加氟方法复制饮水型实验动物模型,并通过检测相应指标检测判断动物模型复制情况;用分子生物学技术检测大鼠各器官组织和体外培养细胞中ERK1/2激酶表达和MDA表达与活性。(2)慢性氟中毒非骨性器官早期损害检测试剂盒试制。将已经筛选出的染氟早期敏感且稳定改变的指标进行组合,应用成熟可靠地检测手段对染氟早期实验动物进行检测,验证指标的检测效果。 【材料】 实验性慢性氟中毒大鼠;体外培养人肝脏、肾脏、神经细胞株;氧化应激酶类检测试剂盒;MAPK信号通路激酶抗体;蛋白质印迹实验试剂;ELISA 实验试剂盒 【可行性】 慢性氟中毒研究在贵阳医学院有多年历史,同时具有地方特色。已经取得丰硕的研究成果,凝聚大量研究者的心血,近年来对氟中毒的研究逐渐深入。本课题组,在非骨性器官损害研究中初步发现一些研究指标在实验动物染氟初期表现出较为敏感的变化,如丝裂原活化蛋白激酶通路(Mitogen activated protein kinases, MAPK)中核心激酶,氧化应激相关激酶等。本课题组成员在慢性氟中毒发病机制研究中已取得一定研究成果,熟练掌握课题完成所需实验技术,已撰写论文投寄发表。课题研究依托的分子病理学实验室及分子生物学实验室具有实验完成所需设备等实验条件。 【创新性】 将基础研究成果应用于临床治疗或病区治理是慢性氟中毒科研工作的最终目的。本课题组力图在已有的较为可靠的研究结果基础之上,进一步研发快捷、简便的试剂盒,特别是对未达到临床诊断标准,但具有神经系统症状和骨骼疼痛等早期表现的病区人群进行慢性氟中毒损害诊断,以期达到早期采取措施进行防治目的。研究结果有望为病区人群较早采取防治措施提供依据。 |
| 关键词: 慢性氟中毒 早期诊断 MAPK 氧化应激 |
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