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| 【目的】 研究九里香抑制软骨细胞凋亡的分子机制是否与EP/cAMP/PKA/β-catenin途径有关。 【方法】 分离培养大鼠膝骨关节原代软骨细胞,给予1 μmol/L PGE2诱导刺激,利用分离九里香(200、100、50 mg/kg)灌胃1个月的大鼠含药血清进行培养。利用流式细胞术、TUNNEL、DAPI染色法研究软骨细胞凋亡情况,利用RT-PCR研究EP2和EP4 的mRNA表达,利用蛋白质印迹法研究EP2、EP4、PKA、p-PKA、p-GSK-3β、β-catenin、caspase-3等蛋白表达,利用ELISA法研究cAMP的表达,利用TOPFLASH/FOPFLASH双荧光素酶报告基因方法研究β-catenin调节的TCF/LEF转录活性。 【结果】 利用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞检测发现,剂量为100、200 mg/kg的九里香可显著抑制软骨细胞凋亡,其凋亡率分别为9.41%和7.11%,而模型组的凋亡率为25.37%。利用TUNNEL、DAPI染色法也发现九里香可显著抑制软骨细胞凋亡。九里香组软骨细胞的EP2和EP4 的mRNA表达均显示下调,其中200 mg/kg剂量组相对模型组分别为0.67和0.61。EP2、EP4、cAMP、PKA、p-PKA、β-catenin、caspase-3等蛋白表达均下调,而p-GSK-3β则表达上调。转染TOPFLASH/FOPFLASH报告质粒后,发现九里香可显著抑制TOPFLASH活性,呈剂量依赖性,而FOPFLASH的活性无明显变化。 【结论】 九里香可抑制PGE2诱导的软骨细胞凋亡,可能是通过抑制EP/cAMP/PKA/β-catenin途径。 |
| 关键词: 九里香 软骨细胞 凋亡 EP/cAMP/PKA/β-catenin |
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