目的 建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）假病毒（SARS-CoV-2 pps）的制备方法。方法 设计、合成序列优化的SARS-CoV-2刺突蛋白（S）基因，构建表达质粒，转染293T细胞，用免疫荧光检测S蛋白的表达；将该质粒与基于慢病毒基因骨架的含增强绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的假病毒包装质粒共转染293T细胞，收集细胞培养上清，感染Vero E6和Huh7细胞，观察细胞内EGFP的表达；将制备的SARS-CoV-2 pps感染Vero E6细胞，检测膜融合抑制剂氯喹和盐酸阿比朵尔、SARS-CoV-2 S1蛋白单克隆抗体及新型冠状病毒肺炎患者恢复期血清对假病毒感染性的影响。结果 构建的SARS-CoV-2 S质粒转染的293T细胞可与S1蛋白单克隆抗体及新型冠状病毒肺炎患者恢复期血清反应。SARS-CoV-2 S质粒与HIV假病毒包装质粒共转染293T细胞的上清加入Vero E6细胞和Huh7细胞36 h和72 h后可分别观察到细胞内表达的EGFP，EGFP阳性的Huh7细胞数量明显多于Vero E6细胞。2种膜融合抑制剂、1株人源S1单克隆抗体及2份新型冠状病毒肺炎患者恢复期血清均可有效抑制SARS-CoV-2 pps对Vero E6细胞的感染（P均<0.01）。结论 成功制备了SARS-CoV-2 pps，其可用于后续抗SARS-CoV-2药物筛选与疫苗评价。]]> 2020/5/18 0:00:00 12true 目的 从新型冠状病毒肺炎（COVID-19）患者鼻/咽拭子样本中分离、培养严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）。方法 将来自上海市COVID-19患者的3份鼻/咽拭子样本以TPCK胰酶处理，然后接种Vero E6细胞；待大部分细胞出现明显病变时，取细胞培养上清用qRT-PCR法检测病毒核酸，并用反转录PCR扩增病毒受体结合区（RBD）基因片段；将病毒扩增培养后感染接种于96孔板中的Vero E6细胞，观察细胞病变效应，并用免疫荧光法检测病毒蛋白。结果 2份COVID-19患者鼻/咽拭子样本接种的Vero E6细胞出现明显细胞病变效应，细胞培养上清中检测出新复制产生的SARS-CoV-2核酸，扩增出的RBD序列与早期分离出的SARS-CoV-2相应序列完全一致；病毒感染的Vero E6细胞病变迅速，并能与SARS-CoV-2核衣壳蛋白（N蛋白）单克隆抗体、刺突蛋白（S蛋白）单克隆抗体及COVID-19患者恢复期血清发生反应。结论 从2份COVID-19患者鼻/咽拭子样本中成功分离出SARS-CoV-2，为后续开展SARS-CoV-2感染与致病机制研究、防治药物与疫苗的研发奠定了基础。]]> 2020/5/18 0:00:00 11true 目的 探讨影响重型新型冠状病毒肺炎（COVID-19）早期治疗效果的相关危险因素。方法 回顾性分析2020年1月至2月在湖北省武汉市汉口医院住院的71例严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）核酸检测阳性的重型COVID-19患者资料。收集患者入院早期生命体征、临床表现、静息状态下脉搏氧饱和度、血常规、肝功能、肾功能、血生物化学、电解质、超敏肌钙蛋白T、凝血功能、脑钠肽前体、肺部CT表现、序贯器官功能衰竭评分（SOFA），以及治疗方式和早期治疗转归等资料。根据治疗2周后的治疗效果分为临床改善组和临床进展组，比较两组患者各项指标的差异，分析影响早期治疗效果的危险因素。结果 临床缓解组患者43例，经治疗后均转为普通型；临床进展组患者28例，10例死亡，15例进展至危重型，3例治疗后无明显改善。两组患者发病前均存在武汉疫区居住史。临床进展组患者中吸烟者所占比例（75.0%，21/28）高于临床缓解组患者（46.5%，20/43），差异有统计学意义（P=0.033）。与临床缓解组患者相比，临床进展组患者淋巴细胞计数［0.80（0.70，0.90）×10⁹/L vs 0.70（0.60，0.70）×10⁹/L］、血小板计数［222（174，310）×10⁹/L vs 193（152，232）×10⁹/L］、纤维蛋白原水平［4.22（3.71，4.80）g/L vs 3.81（2.96，4.38）g/L］降低，差异均有统计学意义（P均<0.05）。两组患者常见临床症状、生命体征、静息状态下脉搏氧饱和度、其余实验室检查指标、SOFA评分、治疗方式等差异均无统计学意义（P均>0.05）。多因素logistic回归分析结果显示，吸烟（OR=4.88，95% CI 1.33～25.00，P=0.020）、白细胞计数≤3.5×10⁹/L（OR=10.00，95% CI 1.47～100.00，P=0.008）、淋巴细胞计数<0.1×10⁹/L（OR=16.67，95% CI 3.33～100.00，P<0.001）是影响患者早期治疗效果的危险因素。结论 有吸烟史、白细胞计数≤3.5×10⁹/L及淋巴细胞计数<0.1×10⁹/L的重型COVID-19患者早期治疗效果不佳的风险较高，建议临床上对有上述危险因素的重型COVID-19患者进行重点诊疗，及早采取有效治疗措施进行干预，以改善预后。]]> 2020/5/18 0:00:00 10true 目的 分析新型冠状病毒肺炎（COVID-19）确诊患者的临床特征及流行病学特征，探讨该病早期识别与诊断的方法与经验。方法 归纳截至2020年2月12日海军军医大学（第二军医大学）长海医院感染科6例确诊COVID-19患者的流行病学特征、症状、体征、实验室检查及影像学检查结果，总结其特点与规律。结果 6例确诊COVID-19患者中男5例，女1例。青年患者2例，年龄分别为28、29岁；中老年患者4例，年龄分别为45、62、71、75岁。6例患者起病前均有明确的流行病学接触史，其中2例为家庭聚集性病例。临床表现均以发热和呼吸道症状为主，临床分型均为普通型。6例患者经上海市杨浦区疾病预防控制中心严重急性呼吸综合征冠状病毒2核酸检测均为阳性，实验室检查提示白细胞计数5例正常，1例略降低；淋巴细胞计数3例减少，3例正常。未见其他呼吸道病原体感染证据。6例患者CT检查结果均具有磨玻璃样或双侧斑片状影等典型病毒性肺炎特征。结论 COVID-19传染性很强，人群普遍易感，尽早识别感染者并隔离传染源是防止病毒传播的重要手段。流行病学史仍然是COVID-19诊断的重中之重，CT联合病毒PCR核酸检测是确诊COVID-19的有效方法。]]> 2020/5/18 0:00:00 9true 目的 探讨抗击新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫情期间呼吸与危重症医学科门诊独立单元运行的模式及其作用。方法 自2020年1月31日（春节假期结束后）开始，我院呼吸与危重症医学科门诊采取独立单元运行模式。分别选择2020年1月13日至23日（春节假期前10个工作日）及2020年1月31日至2月12日（春节假期后10个工作日）于我院呼吸与危重症医学科门诊就诊的患者5 377例和702例，同时选择呼吸与危重症医学科门诊独立单元运行前和运行后均工作在该门诊的医护人员10名。比较门诊独立单位运行前和运行后的就诊人数、接诊具有COVID-19流行病学史的患者人数等医疗指标，患者空间密度和医护人员防护情况等感染控制指标，以及医护人员的焦虑倾向等心理状态指标。结果 呼吸与危重症医学科门诊独立单元运行前即春节假期前10 d门诊量为5 377例，同比增长15.31%（2019年同时期为4 663例）；春节假期后10 d的门诊量为702例，较春节假期前10 d减少86.94%，同比下降83.43%（2019年同时期为4 236例）。独立单元运行前和运行后分别接诊具有COVID-19流行病学史的患者25例和0例，差异无统计学意义（χ²=2.26，P>0.05）。门诊患者候诊时间由独立单元运行前的（178.33±36.24）min缩短至运行后的（8.50±3.59）min，差异有统计学意义（t=10.18，P<0.01）。独立单元运行前和运行后急性上呼吸道感染、急性支气管炎的总比例分别为46.61%（2 506/5 377）和34.90%（245/702），差异有统计学意义（χ²=34.9，P<0.01）；独立单元运行后咳嗽原因待查患者比例［2.42%（17/702）］较运行前［5.41%（291/5 377）］下降，差异有统计学意义（χ²=11.54，P<0.01）；独立单元运行前和运行后，慢性阻塞性肺疾病急性加重、支气管哮喘急性发作所占比例差异均无统计学意义（P均>0.05）；独立单元运行后慢性阻塞性肺疾病配药、支气管哮喘配药总比例为29.34%（206/702），较运行前［15.23%（819/5 377）］升高，差异有统计学意义（χ²=88.23，P<0.01）。诊疗区患者人数密度由独立单元运行前的（1.85±0.35）/m²下降至运行后的（0.31±0.08）/m²，差异有统计学意义（t=10.52，P<0.01）。独立单元运行前、运行后医护人员手部卫生规范、戴口罩规范、戴工作帽者分别为7、7、5人和10、10、10人，差异均无统计学意义（P均>0.05）。医护人员焦虑评分由独立单元运行前的（38.33±2.79）分下降为运行后的（33.61±2.38）分，差异有统计学意义（t=4.97，P<0.01）。独立单元运行后医护人员对防护措施的满意度较运行前提高（9人vs 4人），差异有统计学意义（χ²=20.00，P=0.03）。结论 呼吸与危重症医学科门诊独立单元运行模式是COVID-19疫情暴发期间门诊工作的一种可行的优化模式，具有满足门诊患者需求、缩短就诊流程、加强医护人员职业防护的优势，有助于降低交叉感染、提高医院感染控制水平。]]> 2020/5/18 0:00:00 8true 目的 了解抗击新型冠状病毒肺炎（COVID-19）疫情下不同级别医院的感染防护现况，为职业感染防护提供策略和建议。方法 选取不同级别医院的一线医师，于2020年3月2日至9日通过微信平台进行网络调研。通过问卷星调研平台设计调查问卷，内容包括一线医师基本信息、防护知识内容、抗击疫情工作环境、医用防护用品管理和防护措施实施情况等。结果 共回收有效问卷966份，由上海市15个区9所三级综合性医院、42所社区卫生服务中心的一线医师填写。社区卫生服务中心一线医师的COVID-19疫情相关知识培训率高于三级综合性医院［90.45%（644/712）vs 79.53%（202/254），χ²=20.528，P=0.001］，根据COVID-19相关内容识别相应类别患者（χ²=27.108，P=0.009）、手部卫生消毒和防护服穿脱（χ²=22.666，P=0.001）及正确处理医疗废弃物（χ²=74.251，P=0.001）等的掌握程度均优于三级综合性医院。COVID-19防护措施执行过程中，社区卫生服务中心一线医师能够严格按需、按防护强度更换一次性防护服的比例［31.74%（226/712）］高于三级综合性医院［25.20%（64/254）］，差异有统计学意义（χ²=33.229，P=0.001）。社区卫生服务中心与三级综合性医院一线医师在正确实施患者的标本采集、防护面罩更换频率、疫情期间每周在院工作时长方面的差异均无统计学意义（P均>0.05）。结论 在本次COVID-19疫情防护中，社区卫生服务中心起到了重要的网底作用。部分防护措施在社区卫生服务中心和三级综合性医院之间有所不同，需进一步完善降低医疗机构COVID-19职业感染风险的合理措施。]]> 2020/5/18 0:00:00 7true 目的 探讨新型冠状病毒肺炎（COVID-19）的中医辨治规律，为指导中医临床提供参考。方法 采取横断面调查方法，对756例湖北省妇幼保健院光谷院区在院COVID-19患者进行中医四诊信息收集和中医辨证，分析其证候特点，并与患者性别、年龄、病程、病情分型等进行相关分析。结果 756例患者中，寒湿郁肺证101例（13.4%），湿热蕴肺证239例（31.6%），疫毒闭肺证18例（2.4%），肺脾气虚证195例（25.8%），气阴两虚证203例（26.9%）；其中位病程依次为寒湿郁肺证（21 d） < 湿热蕴肺证（22 d） < 疫毒闭肺证（27 d） < 脾肺气虚证（33 d） < 气阴两虚证（36 d）。证候分布在不同性别间差异无统计学意义（P>0.05）；>65岁患者中湿热蕴肺证的比例低于≤ 65岁患者［22.4%（69/308）vs 37.9%（170/448）］，肺脾气虚证［30.2%（93/308）vs 22.8%（102/448）］和气阴两虚证［34.1%（105/308）vs 21.9%（98/448）］则正好相反（P<0.01）。证候分布与COVID-19病情分型和病程有关（P=0.01，P<0.01），寒湿郁肺证在病情轻者（轻型+普通型）［14.1%（86/612）］中相对多见，疫毒闭肺证在病情较重者（重型+危重型）［6.2%（9/144）］中相对多见；寒湿郁肺证在疾病早期［26.2%（28/107）］常见，湿热蕴肺证在早期［43.9%（47/107）］、中期［42.0%（116/276）］均较常见，肺脾气虚证和气阴两虚证在中期、后期占比较高［中期21.7%（60/276）、18.1%（50/276），后期31.1%（116/373）、38.1%（142/373）］。结论 COVID-19患者证候偏热偏实，随病程进展因实致虚，其证候与患者年龄、病情分型和病程有关。]]> 2020/5/18 0:00:00 6true 2020/5/18 0:00:00 5true 2020/5/18 0:00:00 4true 2020/5/18 0:00:00 3true 2020/5/18 0:00:00 2true 2020/5/18 0:00:00 1true