2018/8/6 0:00:00 8true 2018/8/6 0:00:00 7true 2018/8/6 22:15:57 1,王一然²,朱明向²,王奇金^3*]]> 6true 2018/8/6 0:00:00 5true 目的 通过对比不同方法抽提的不同组织中的细胞外囊泡的差异和特点，探寻组织中细胞外囊泡的分离纯化方法，为组织微环境中细胞外囊泡的功能和机制研究奠定基础。方法 采用胶原酶消化法对肾脏、前列腺、皮肤和胃4种组织进行脱细胞处理，制备细胞外基质悬液，分别采用Qiagen外泌体抽提试剂盒、SBI外泌体抽提试剂盒及超速离心法（UC）抽提细胞外囊泡，然后使用ATS粒度分析仪qNano技术检测细胞外囊泡的粒径和浓度等。结果 采用3种方法对4种组织的细胞外基质悬液进行抽提，均可获得纯化的细胞外囊泡，主要囊泡类型为外泌体。不同组织中细胞外囊泡粒径分布存在一定的差异，但粒径大小差异无统计学意义（P>0.05）。等质量组织中均以UC抽提得到的细胞外囊泡浓度最高，与另外2种方法相比差异有统计学意义（P<0.01）；不同组织间比较，以前列腺和肾脏获得的细胞外囊泡浓度较高，而胃和皮肤较低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 不同组织中均以UC抽提得到的细胞外囊泡浓度最高；不同类型组织微环境中存在的细胞外囊泡的浓度有差异。]]> 2018/8/6 0:00:00 1,曾韬¹,叶誉胜²,王越^1,3*]]> 4true 目的 探讨分离主动脉夹层患者尿液来源外泌体的适宜方案。方法 收集主动脉夹层患者尿液，采用超速离心法、透析超滤法和沉淀试剂盒法分离提纯尿液中的外泌体。在生物透射电子显微镜下观察尿液外泌体的形态，用纳米颗粒跟踪分析仪检测其粒径大小、颗粒分布与浓度。结果 经过表征，3种方法获得的尿液外泌体特征如下：（1）超速离心法获得的尿液外泌体具有半杯托状或凹陷的半球形结构；粒径较大，分布较均匀；粒径范围较宽，为（236.4±46.5）nm；浓度较低，为（2.82±0.21）×10¹²个/mL；（2）透析超滤法获得的尿液外泌体形态较好，且数量多；粒径较小，分布较集中；粒径范围较窄，为（128.7±6.3）nm；浓度较大，为（2.16±0.15）×10¹⁴个/mL；（3）沉淀试剂盒法获得的产物在生物透射电子显微镜下未见明显的外泌体结构。结论 主动脉夹层患者采用透析超滤法分离获得的尿液外泌体浓度较高，在对外泌体的纯度要求不是特别高的情况下比较适宜。]]> 2018/8/6 0:00:00 1,钱晓庆²,徐志云^1*]]> 3true 目的 探讨人脐带间充质干细胞（hucMSC）分泌的外泌体对骨折愈合的影响及作用机制。方法 取12只雄性SD大鼠构建胫骨骨折模型，将其随机分为3组，每组4只。各组大鼠分别于骨折术后7 d予以如下处理：空白对照组，骨髓腔内注射磷酸盐缓冲液；hucMSC-外泌体组，骨髓腔内注射hucMSC分泌的外泌体；hucMSC-上清组，骨髓腔内注射hucMSC的去外泌体培养上清。治疗3周后通过micro-CT检测和组织切片H-E染色评价大鼠骨折断端愈合情况，qPCR法检测骨组织中成骨标志基因骨钙素（OCN）、骨桥蛋白（OPN）、碱性磷酸酶（ALP）和Runt相关转录因子2（Runx-2）的表达。结果 活体micro-CT扫描结果显示，空白对照组、hucMSC-上清组大鼠的骨折断端尚未吻合，骨皮质外观不连续，骨折线明显；hucMSC-外泌体组大鼠的骨折断端对合良好，骨皮质外观较连续，骨折线基本消失。H-E染色结果显示，空白对照组、hucMSC-上清组大鼠的纤维骨痂尚未形成，新生骨小梁结构不明显；hucMSC-外泌体组大鼠已经形成完整的纤维骨痂结构，新生骨小梁结构较多、排列较为规则。hucMSC-外泌体组大鼠骨组织中OCN、OPN、ALP和Runx-2的表达量高于空白对照组和hucMSC-上清组，差异均有统计学意义（P均<0.05）。结论 hucMSC分泌的外泌体能促进骨折愈合，其机制可能与促进OCN、OPN、ALP和Runx-2表达有关。]]> 2018/8/6 0:00:00 1,崔浩诚¹,万冬灵²,唐昊^1*]]> 2true 目的 研究血清外泌体中微RNA-21（miR-21）表达水平及其对哮喘严重程度的诊断效能。方法 以82例未经治疗的哮喘患者和80名健康人作为研究对象。将哮喘患者根据病情严重程度分为4组：间歇状态20例、轻度持续22例、中度持续22例、重度持续18例。用qPCR检测各组血清外泌体中miR-21的表达水平，并进行比较。用Spearman相关分析研究血清外泌体中miR-21表达水平与哮喘严重程度的相关性。通过受试者工作特征（ROC）曲线评价外泌体中miR-21表达水平对哮喘严重程度的诊断效能。结果 间歇状态、轻度持续、中度持续和重度持续的哮喘患者血清外泌体中miR-21表达水平均高于健康对照组，差异均有统计学意义（P均<0.01），且哮喘患者各组间miR-21表达水平差异也有统计学意义（P均<0.01）。Spearman相关分析结果显示，血清外泌体中miR-21的相对表达量与哮喘严重程度呈正相关（r=0.974，P=0.016 7）。血清外泌体中miR-21对间歇状态、轻度持续、中度持续、重度持续哮喘患者诊断效能的ROC曲线下面积分别为0.657、0.769、0.847、0.916（P均<0.01）。结论 血清外泌体中miR-21表达水平对治疗前哮喘严重程度有较高的诊断效能，有望成为判断哮喘严重程度的一种无创性诊断标志物。]]> 2018/8/6 0:00:00 1△,陈乾^2△,孙亚红³,白冲¹,商艳^1,3*]]> 1true