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| 目的:探讨胎肝间充质细胞在体外向神经元样细胞分化的潜能.方法:无菌条件下获取胎龄14.5 d的胎肝细胞,DMEM/HEPES/F12(20％FCS)培养得到贴壁细胞并传代,第5代细胞经β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-ME)与全反式维甲酸(all-trans-rentinoic acid,ATRA)程序化诱导处理后5 h、5 d,用免疫细胞化学鉴定神经元抗原表达,同时用半定量RT-PCR检测神经元相关基因mRNA表达情况.结果:胎肝间充质细胞经β-ME、ATRA诱导处理后,约80％细胞呈现典型的神经元样的形态表型.免疫细胞化学显示诱导分化后的细胞表达神经元特异蛋白如神经元核特异性抗原(neuron-specific nuclear protein,NeuN)、神经元特异性管蛋白Ⅲ型(neuronc-specific tubulin Ⅲ,TuJ-1)、神经丝蛋白中链(neurofilament-M,NF-M)及神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE),但是无成熟神经元微管相关蛋白Tau(microtubule-associated protein tau, Tau-1)、微管相关蛋白2(microtubule-associated protein-2, MAP-2)表达.半定量RT-PCR结果显示诱导分化后的细胞酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)mRNA有表达,脑因子1基因(brain factor 1,BF-1)、脑因子3基因 (brain-3, Brn-3)、神经丝蛋白轻链基因(neurofilament-L,NF-L)表达增加,与未处理组比较均有统计学差异(P<0.01).结论:胎肝间充质细胞在体外培养条件下,经过β-ME与ATRA程序化诱导,可以分化成早期未成熟神经元样细胞. |
| 关键词: 胚胎、肝、神经元、间充质细胞、细胞分化 |
| DOI： |
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| 基金项目: |
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| Differentiation of mesenchymal cells derived from mouse fetal liver into neuronal cells in vitro |
| 刘平平,张洹,刘革修 |
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