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| 细菌双杂交系统在细胞外蛋白质相互作用中的应用 |
| 张弛,王梁华,罗以勤,张兴群,高云,史薇,包晨颖,球谊,焦炳华 |
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| 摘要: |
| 目的:探索应用细菌双杂交系统在细胞外蛋白质之间相互作用的可行性.方法:应用Stratagene BacterioMatch two hybrid system,以pTRG构建编码TRAIL细胞外可溶性区域序列融合表达质粒;以pBT构建编码DR4、DR5、OPG等的细胞外区域序列融合表达质粒.重组质粒分别相应共转化报告菌株XL1-Blue MRF,报道基因产物以抗羧苄青霉素和β-半乳糖苷酶活性作为转录激活的指标.结果:pTRG-TRAIL与pBT-DR4,pTRG-TRAIL与pBT-DR5及对照组分别共转化后在高浓度羧苄青霉素(500 μg/ml以上)筛选下宿主菌呈转录激活状态,pTRG-TRAIL与pBT-OPG 组共转化后在低浓度羧苄青霉素(250 μg/ml以下)筛选下宿主菌呈转录激活状态,用X-Gal-PETG平皿可以进一步验证阳性克隆.对照组pTRG-TRAIL与pBT-LGF2,pBT-DR4、pBT-DR5或pBT-OPG与pTRG-Gal11 4组共转化后呈阴性.结论:所用的双杂交序列皆为编码这些蛋白质的细胞外区域,而这些蛋白质本身的相互作用已有其他报道验证,所以细菌双杂交系统可以用于细胞外蛋白质的相互作用研究. |
| 关键词: 细菌双杂交系统、细胞外蛋白质、TNF相关凋亡诱导配体、DR4、DR5、DcR1、DcR2、OPG |
| DOI： |
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| 基金项目: |
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| Application of a bacterial two-hybrid system in extracellular protein interactions |
| 张弛,王梁华,罗以勤,张兴群,高云,史薇,包晨颖,球谊,焦炳华 |
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| Abstract: |
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| Key words: |
