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| 目的:对人乳白蛋白酵母人工染色体(HLA-YAC)进行定点改造,以便进一步利用该载体作与基因表达调控相关的研究.方法:借助kar1突变使YPH925菌株与异交配型菌株交配时丧失核融合的能力,把HLA-YAC由酵母AB1380转移到his3缺陷的YPH925菌株.分别以HIS3(对YPH925菌株)和G418R(对YPH925和AB1 380两种菌株)为选择标记,用含HLA-YAC的酵母基因组为模板,PCR克隆人乳白蛋白(HLA)基因的5'和3'端非翻译区各684 bp和940 bp为同源臂,构建打靶载体,线性化的打靶载体经电转化或醋酸锂转化转入酵母内,以菌落PCR为鉴定方法,辅以测序验证.结果:HLA-YAC在目的位置完成了定点打靶修饰,G418R的筛选效率高于HIS3,醋酸锂转化方法的打靶效率稍高于电转化.结论:对YAC的成功修饰为在动物体内的表达及调控研究打下了基础. |
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| DOI：10.3724/SP.J.1008.2004.00633 |
| 投稿时间：2003-10-10修订日期：2004-03-05 |
| 基金项目:上海市自然科学基金(012F14064) |
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| Site-specific modification of human α-lactalbumin yeast artificial chromosome by targeting under different conditions |
| 张绪峰,吴国祥,朱克军,焦炳华,成国祥 |
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