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| 目的:制备胶质细胞源性神经营养因子受体α1(GFRα1)的突变体质粒,并建立rGFRα1各突变体和RET基因双转染的稳定RCE细胞株.方法:通过Fugene6脂质体转染试剂,将PCR法快速制备的pcDNA3-rGFRα1突变体质粒分别与带潮霉素B抗性筛选标记的pcDNA3.1-RET质粒共转染野生型PC12细胞,建立rGFRα1各突变体和RET基因双转染的稳定PC12细胞株.经Western印迹和细胞免疫荧光化学方法对转染入PC12细胞中的各rGFRα1突变体基因和RET基因的表达进行鉴定.结果:Western印迹和细胞免疫荧光化学方法检测均证实了所构建的细胞株中有转入基因的正确表达.结论:成功构建了rGFRα1各突变体基因和RET基因同时转入表达的稳定细胞株,为研究rGFRα1中关键氨基酸的位点参与胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)信号转导的作用奠定基础. |
| 关键词: 胶质细胞源性神经营养因子受体α1(GFRα1)、RET、PC12细胞 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2004.01082 |
| 投稿时间：2004-02-27修订日期：2004-07-22 |
| 基金项目:国家自然科学基金(30370454)、国家自然科学基金(30325022)、国家重点基础研究发展计划(973计划)(2002CB713808)、教育部跨世纪优秀人才培养计划 |
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| Preparation of GFRα1 mutants and establishment of PC12 cell line stably expressing constructed mutants |
| 朱伟,张勇,陈哲宇,王丽梅,路长林,何成 |
| (第二军医大学基础医学部神经生物学教研室,上海,200433) |
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