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| 目的:在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子(osteoclastogenesis inhibitory factor,OCIF)成熟肽基因.方法:利用PCR从人肝细胞文库中扩增得到OCIF成熟肽编码基因序列,将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌K802,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-OCIFm,双酶切重组克隆质粒pMD18-OCIFm得到OCIF成熟肽基因,将其定向插入pMAL-c2载体中,转化大肠杆菌TB1.筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达.结果:所获得的OCIF成熟肽基因编码序列经测序与GenBank报道的完全一致.所表达的产物经SDS-PAGE分析可见在相对分子质量80000处出现一条特殊条带,与预期的相对分子质量一致.Western印迹证实了表达产物的正确.表达产物在高剂量(＞120ng/L)时可诱导体外培养小鼠成熟破骨细胞的凋亡.结论:成功获得了人OCIF成熟肽基因的克隆并实现了其在大肠杆菌中的融合表达. |
| 关键词: 破骨细胞形成抑制因子、基因克隆、融合蛋白 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2004.01086 |
| 投稿时间：2004-01-30修订日期：2004-03-08 |
| 基金项目:国家自然科学基金(30000078)、国家高技术研究发展计划(863计划)(2001AA215441) |
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| Cloning and expression of human osteoclastogenesis inhibitory factor mature peptide gene in E.Coli |
| 张兴群,王梁华,袁勤生,缪辉南,焦炳华 |
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