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| 膜结合型抗大鼠FcεRIα单克隆抗体制备及活性鉴定 |
| 李莉,李先兴,徐银海,张玲珍,孔宪涛,仲人前 |
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| (第二军医大学长征医院实验诊断科,上海,200003;长征医院器官移植中心;徐州医学院附属医院检验科,徐州,220114) |
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| 摘要: |
| 目的:建立抗鼠FcεRI单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),为靶向诱导肥大细胞凋亡创造条件.方法:大鼠嗜碱性粒细胞细胞系RBL-2H3免疫的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,ELISA筛选鼠血清和融合细胞产生的抗体,有限稀释克隆化培养.SDS-PAGE胶电泳、免疫扩散鉴定抗体性质,IgE竞争结合、组胺释放检测抗体生物活性,125I-细胞膜抗体复合物免疫沉淀放射自显影鉴定抗体识别抗原成分.结果:获得2株抗FcεRIα McAb生产细胞株ER-E5.3、ER-C7.4,均为IgG1.培养上清和小鼠腹水获得的抗体效价均大于10-5.流式细胞术分析抗体与RBL-2H3结合率均大于95%,与大鼠胸腺细胞和外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte,PBL)无交叉反应,并能竞争性抑制IgE与肥大细胞结合.抗体触发RBL-2H3脱颗粒,组胺释放效应与抗原特异性IgE对肥大细胞的激活效应相同.酶切的Fab片段能与RBL-2H3结合,也能竞争抑制IgE与肥大细胞的结合,但不致RBL-2H3脱颗粒.抗体结合的细胞膜成分为α亚单位.结论:大鼠肥大细胞免疫小鼠与骨髓瘤细胞融合得到2株抗体产生杂交瘤克隆ER-E5.3和ER-C7.4,抗体效价和功能活性达到了实验要求,抗原识别成分为膜FcεRIα. |
| 关键词: FcεRIα、抗体,单克隆、肥大细胞 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2004.01303 |
| 投稿时间：2004-07-28修订日期：2004-09-20 |
| 基金项目:国家自然科学基金(30171200) |
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| Preparation of membrane binding monoclonal antibody anti rat FcεRIα and dectection of its activity |
| 李莉,李先兴,徐银海,张玲珍,孔宪涛,仲人前 |
| (第二军医大学长征医院实验诊断科,上海,200003;徐州医学院附属医院检验科,徐州,220114) |
| Abstract: |
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| Key words: |
