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| 人源抗-HBs Fab表达系统的转换与效果 |
| 韩焕兴,陆慧琦,郑大勇,叶伟民,朱烨,罗荣城 |
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| (第二军医大学长征医院实验诊断科,上海,200003;南方医科大学南方医院肿瘤科,广州,510515) |
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| 目的:重新克隆抗-HBs Fab基因于pBAD载体,改变诱导方式与表达条件,提升原核表达人源抗体片段的经济性与实用性.方法:经3次基因扩增,分步克隆,将Fd、Lc与pBAD/Lc基因先后插入到pBAD载体中,形成单载体双启动、定向表达形式.筛选双重插入菌落,阿拉伯糖诱导表达,PAGE和Western印迹鉴定抗-HBs Fab的表达效果.结果:酶切克隆载体,琼脂糖电泳证实Fd和pBAD/Lc基因的正确插入;PAGE可见明显的相对分子质量近50 000的蛋白区带,Western印迹显示该区带确为Fab;HBsAg特异印迹表明表达产物具有抗原结合活性.结论:比较原pComb3表达系统,改变后的pBAD表达系统明显提高了抗-HBs Fab的表达量(可达70 mg/L)并保持了抗体活性,为该抗体的批量制备与临床应用提供了条件. |
| 关键词: 抗-HBs Fab、pBAD载体、基因表达 |
| DOI：10.3724/SP.J.1008.2004.01338 |
| 投稿时间：2004-07-23修订日期：2004-10-15 |
| 基金项目:上海市科委资助项目(004319208) |
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| Modification of human anti-HBs Fab expression system and the results |
| 韩焕兴,陆慧琦,郑大勇,叶伟民,朱烨,罗荣城 |
| (第二军医大学长征医院实验诊断科,上海,200003;南方医科大学南方医院肿瘤科,广州,510515) |
| Abstract: |
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| Key words: |
