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| 多囊蛋白1表达载体的构建及表达 |
| 赵海丹;梅长林;孙田美;张树忠 |
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| (第二军医大学长征医院肾内科,第二军医大学长征医院肾内科,第二军医大学长征医院肾内科,第二军医大学长征医院肾内科 解放军肾脏病中心,上海200003 ,解放军肾脏病中心,上海200003 ,解放军肾脏病中心,上海200003 ,解放军肾脏病中心,上海200003) |
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| 摘要: |
| 目的 :体外表达并纯化多囊蛋白 1胞外区片段。方法 :提取健康人肾组织总 RNA,用一步法 RT- PCR选择扩增编码多囊蛋白 1胞外多拷贝区的 2个 c DNA片段 ,并将之克隆到融合蛋白表达载体 p QE30中 ,转染含有阻遏质粒 p REP4的大肠杆菌 M15。异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达融合蛋白 ,用亲和层析法纯化。纯化产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白质印迹分析鉴定。 结果 :克隆到 2个编码多囊蛋白 1胞外区的 c DNA片段 ,其大小分别为 5 0 2 bp和 4 71bp。构建的表达质粒p QE30 - PK D1e1和 p QE30 - PK D1e2经限制性内切酶酶切和 DNA测序证实为所需要的质粒。表达出相对分子质量分别为19 80 0、1890 0的融合蛋白 ,经蛋白质印迹分析鉴定为多囊蛋白 1的融合蛋白。结论 :本实验克服了 PK D1基因在体内多个同源序列的干扰 ,克隆了编码多囊蛋白 1胞外多拷贝区的 c DNA序列 ,并成功地获得了融合表达的目的蛋白 ,为进一步制备抗多囊蛋白 1胞外区的抗体创造了条件 |
| 关键词: 多囊蛋白1 多囊肾病 常染色体显性 融合蛋白 多拷贝区 |
| DOI： |
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| Key words: |
